[发明专利]非洲猪瘟病毒的检测靶标以及荧光定量PCR检测引物

说明书

本发明公开了非洲猪瘟病毒的检测靶标以及荧光定量PCR检测引物。本发明以ASFV中国流行毒株为对象，选择多基因家族中相对保守又具研究和应用前景的MGF360‑13L基因为靶标，建立了ASFV MGF360‑13L TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。本发明方法可实现对最低15.6拷贝/μL ASFV核酸的检测，与多种病原不存在交叉反应，相比常规PCR检测方法，本发明检测方法在敏感性上高出3个数量级。本发明所建立的检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，与已有的经典检测方法符合率高，能够对可疑样品进行二次确认，不仅丰富了ASFV现有检测靶标，也能鉴别ASFV MGF基因趋势疫苗毒与野毒感染。

技术领域

本发明涉及病毒的检测靶标，尤其涉及非洲猪瘟病毒的检测靶标、荧光定量PCR检测引物以及由此建立的非洲猪瘟病毒MGF360-13L基因TaqMan荧光定量PCR检测方法，属于非洲猪瘟病毒的检测或诊断领域。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus,ASFV)感染猪引起的一种接触传染性、广泛出血性、烈性传染病，最急性和急性型感染死亡率可高达100％，是养猪业的头号杀手。该病目前已呈现出跳跃式传播，自2007年再次传入欧洲后，迅速扩散至俄罗斯、乌克兰、拉脱维亚、波兰等十多个东欧国家。2018年8月传入中国后，不到一年时间扩散至蒙古、朝鲜、以及越南、柬埔寨、老挝、缅甸韩国、泰国、东帝汶等多个亚洲国家。该病已呈现出全球流行趋势，对全球养猪业的健康发展造成了重大威胁。截止目前，中国已累计爆发ASF疫情158起，扑杀猪只超过数百万头，保守估计造成直接经济损失数百亿元。由于无商品化疫苗可用，加之ASFV污染面积较广，中国ASF的防控和根除形式异常严峻(王涛,孙元,罗玉子,仇华吉.非洲猪瘟防控及疫苗研发:挑战与对策.生物工程学报,2018,34(12):1931-1942.DIXON L K,ISLAM M,NASH R,REIS A L.Africanswine fever virus evasion of host defences.Virus Research,2019,266:25-33.)。