[发明专利]一种转录组测序文库快速构建方法及其应用有效
| 申请号： | 201911384231.6 | 申请日： | 2019-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN110951827B | 公开（公告）日： | 2021-06-08 |
| 发明（设计）人： | 杨学敏;陈永顺;张燕菲;高丰鑫 | 申请（专利权）人： | 广州表观生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 广州独角熊知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 44580 | 代理人： | 张小黎 |
| 地址： | 510663 广东省广州市黄埔区科*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转录 序文 快速 构建 方法 及其 应用 | ||
1.一种转录组测序文库快速构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）获取样品中的mRNA；
2）将1）所得产物加入含Mg2+的第一缓冲体系中，在90-105℃条件下反应，获得片段化处理后的产物，所述产物长度为100-300bp；
3）将2）所得产物加入cDNA第一链合成体系中得混合物，反应获得含有cDNA第一链的产物，所述混合物中包括逆转录引物、TSO引物；其中：
所述逆转录引物可形成茎环结构，所述逆转录引物的序列包括：
茎区-环区-茎区-poly(N)区，N选自ATCG中的任一种，具体如下：GGAGATCGTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTCCNNNNNNN；
所述TSO引物的序列包括：
第一接头序列-第二接头序列-poly(G)区，具体如下：TCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTrGrG+G；
所得cDNA第一链的5'末端连接有所述TSO引物，3'末端连接有所述逆转录引物；
4）将3）所得产物加入第一轮PCR体系中，扩增获得第一轮PCR扩增产物，其中，所述第一轮PCR体系中，采用的扩增引物包括如下引物组：
引物组一：FR引物、P7 RF引物，
其中，FR引物的序列包括：TSO引物的第一接头序列；P7 RF的序列包括：逆转录引物的环区-茎区序列；
5）将4）所得第一轮PCR扩增产物进行第二轮PCR扩增，获得mRNA文库；其中，所述第二轮PCR扩增中，采用的扩增引物包括如下引物组：
引物组二：P5 FR引物、P7 RF引物，
其中，P5 FR的序列包括：TSO引物的第一接头序列以及第二接头序列。
2.如权利要求1所述的转录组测序文库快速构建方法，其特征在于，所述步骤2）中，所述第一缓冲体系为：
3.如权利要求1所述的转录组测序文库快速构建方法，其特征在于，所述步骤2）中，在94℃条件下片段化处理8-12分钟获得片段化处理后的mRNA。
4.如权利要求1所述的转录组测序文库快速构建方法，其特征在于，所述步骤3）中，所述第一链合成体系为：
5.如权利要求1所述的转录组测序文库快速构建方法，其特征在于，所述步骤3）中，所述第一链合成体系反应条件为：
6.一种转录组测序文库快速构建试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2所述的第一缓冲体系、如权利要求4所述的第一链合成体系。
7.一种如权利要求1所述的转录组测序文库快速构建方法或如权利要求6所述的转录组测序文库快速构建试剂盒在构建转录组测序文库中的应用。
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