[发明专利]一种制备乳腺癌骨转移类器官的方法

说明书

本公开涉及一种制备乳腺癌骨转移类器官的方法，该方法包括：将乳腺癌骨转移细胞、饲养层细胞、温敏性水凝胶和第一培养基混合，进行培养，得到乳腺癌骨转移类器官；其中，所述饲养层细胞包括不具备增殖功能的骨髓间充质干细胞。通过上述技术方案，通过利用不具备增殖功能的骨髓间充质干细胞作为乳腺癌骨转移类器官培养的饲养层细胞，本公开的方法培养乳腺癌骨转移类器官的成功率较高。

技术领域

本公开涉及生物医药技术领域，具体涉及一种制备乳腺癌骨转移类器官的方法。

背景技术

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，乳腺癌患者中99％是女性，男性仅占1％。乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落，乳腺癌细胞一旦脱落，游离的乳腺癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命，其中，乳腺癌细胞转移至相邻的骨骼后形成乳腺癌骨转移。乳腺癌骨转移占乳腺癌转移首发症状的27％-50％，在复发转移性乳腺癌病程中的发生率为65-70％，发生率较高。乳腺癌骨转移能引起患者骨痛、病理性骨折和脊髓压迫等相关事件，严重影响患者的生存质量和总体预后。

目前，治疗乳腺癌骨转移的方法主要有化疗、内分泌治疗和分子靶向治疗等全身治疗以及手术治疗和放疗，除此之外，还可以利用骨调节药物治疗骨转移相关事件，并且骨调节药物治疗已逐渐成为这些治疗手段中的最佳选择。然而，骨调节药物并不能预防乳腺癌骨转移的发生，同时也没有可靠证据能证实其可以延长乳腺癌骨转移患者的生存时间。因此，急需进行大量的药物实验来筛选可以监测、预防以及治疗乳腺癌骨转移的靶向药物。

3D肿瘤类器官能在较高程度上模拟肿瘤生长所需的微环境，保存了肿瘤的异质性、组织特性及基因突变信息，可以在体外模拟癌症的发生、发展过程，构建疾病模型，可以用于肿瘤治疗药物的筛选。

现有技术中，可以利用乳腺癌骨转移组织进行乳腺癌骨转移类器官的培养，但是使用常规体外培养方法培养乳腺癌骨转移类器官的成功率较低。

发明内容

为了解决现有乳腺癌骨转移类器官培养时存在的成功率较低的问题，本公开提供一种制备乳腺癌骨转移类器官的方法。

为了实现上述目的，本公开提供一种制备乳腺癌骨转移类器官的方法，该方法包括：

将乳腺癌骨转移细胞、饲养层细胞、温敏性水凝胶和第一培养基混合，进行培养，得到乳腺癌骨转移类器官；其中，所述饲养层细胞包括不具备增殖功能的骨髓间充质干细胞。

可选地，所述第一培养基中含有DMEM/F12培养基和生长因子，所述生长因子包括A83-01、Noggin、青链霉素、FGF7、FGF10、Y-27632、Nicotinamide、EGF和BSA。

可选地，所述生长因子中，A83-01的浓度为400-600ng/mL，Noggin的浓度为50-150ng/mL，青链霉素的浓度为50-150μg/mL，FGF7的浓度为1-15ng/mL，FGF10的浓度为1-15ng/mL，Y-27632的浓度为1-15μmol/L，Nicotinamide的浓度为1-15mmol/L，EGF的浓度为1-15ng/mL，BSA的浓度为1-10mg/mL。

可选地，所述乳腺癌骨转移细胞由乳腺癌骨转移组织酶解得到，利用乳腺癌骨转移组织酶解得到所述乳腺癌骨转移细胞的方法包括：

a、将乳腺癌骨转移组织碎块与酶解液混合并进行酶解，得到第一酶解物料；

b、将所述第一酶解物料与酶解液混合后置于细胞筛中，进行研磨，收集滤液，得到第二酶解物料；

c、将所述第二酶解物料进行离心，收集沉淀，得到乳腺癌骨转移细胞；其中，所述离心的条件包括：离心力为200-400g，离心时间为1-10min。

可选地，所述酶解液中含有DMEM/F12培养基和1-10％的FBS、1-10mg/mL的胶原蛋白水解酶。