[发明专利]一种短链芳香烃分子介导硅基底固定DNA探针的方法

权利要求书

1.一种短链芳香烃分子介导硅基底固定DNA探针的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：建立基于AFM的微纳加工系统；

S2：利用微纳加工系统和机械-化学相结合的方法制作可控自组装芳香烃单层膜；

S3：将DNA探针固定在所述芳香烃偶连层修饰的硅表面；

S4：对DNA进行检测和表征。

2.根据权利要求1所述的短链芳香烃分子介导硅基底固定DNA探针的方法，其特征在于，所述微纳加工系统包括AFM和三维精密微动工作台。

3.根据权利要求1所述的短链芳香烃分子介导硅基底固定DNA探针的方法，其特征在于，所述S2中，将预处理的硅基底放置于微加工系统的溶液池中，通过外部软件进行编程控制，设置显微镜的各项参数，扫描范围为0nm，设定点电压设置为刻划要求值，然后使针尖逼近样品，达到设定的弯曲量，驱动工作台沿着某一个方向移动，完成硅表面机械刻划的同时化学自组装同步进行。

4.根据权利要求3所述的短链芳香烃分子介导硅基底固定DNA探针的方法，其特征在于，所述硅基底采用硅片去油清洗后进行腐蚀氧化的硅片。

5.根据权利要求1所述的短链芳香烃分子介导硅基底固定DNA探针的方法，其特征在于，所述S3中，利用机械-化学方法在四氟化硼苯甲酸重氮中刻划硅表面，在其上制造规则有序的外端为羧基的自组装微纳结构，用氨基和荧光分别修饰单链DNA的两端，最后在共价偶联活化剂EDC的作用下，探针的氨基与微结构上的羧基反应形成酰胺键，就完成了DNA探针共价连接到微结构上，这样带有荧光标志的ssDNA被固定到硅表面，就完成了DNA探针的固定工作。

6.根据权利要求5所述的短链芳香烃分子介导硅基底固定DNA探针的方法，其特征在于，在四氟化硼苯甲酸重氮盐溶液中刻划硅片从而生成自组装微纳结构，此时微结构末端基团是羧基，然后在N-乙基-N’-碳二亚胺的共价偶联剂作用下，与ssDNA3’端修饰的氨基发生反应形成酰胺键，这样就实现了ssDNA通过自组装微纳结构在硅上的连接。

7.根据权利要求6所述的短链芳香烃分子介导硅基底固定DNA探针的方法，其特征在于，实验所使用的ssDNA是5’端标记FAM荧光，3’端修饰-NH2，探针长度为24bp，5’端到3’端的碱基序列为GCA AAG GGT CGT ACA CAT CAT CAT，分子量为8063.5，净含量为30.0OD，EDC需在-20℃冷冻保存；为了检测出连接上去的ssDNA，在其上标记了FAM荧光，关于ssDNA的操作必须在暗室中进行，取放时需要用锡纸严密包裹，避免荧光淬灭。

8.根据权利要求1所述的短链芳香烃分子介导硅基底固定DNA探针的方法，其特征在于，所述S4中，利用荧光标记方法对DNA探针在硅基片上的固定与杂交过程进行系统分析与优化，包括基片的清洗、探针长短、目标DNA的选择；使用Olimpus BX51正置荧光显微镜对刻划组装区域进行表征，证明DNA分子的固定成功，为了进一步分析固定的DNA探针的数量和质量，需要利用电导检测方法对DNA探针进行检测，通过电学检测信号的强弱进行深入的对比分析。