[发明专利]一种β-琼脂糖酶及其在琼脂定量检测中的应用

权利要求书

1.一种β-琼脂糖酶，其特征在于：为β-琼脂糖酶Aga16_WA，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

2.权利要求1中所述β-琼脂糖酶的编码基因，其特征在于：其核苷酸序列为SEQ ID NO.2及其他可翻译出SEQ ID NO. 1的所有基因。

3.权利要求1中所述的β-琼脂糖酶的制备与纯化方法。

4.如权利要求1所述的β-琼脂糖酶在琼脂定量检测中的应用。

5.一种酶法检测琼脂含量的试剂盒，其特征在于：包括试剂A、试剂B、试剂C和校准品，其中试剂A包含权利要求1中所述的β-琼脂糖酶Aga16_WA与稳定剂，试剂B为显色剂，试剂C为NaOH溶液，校准品为琼脂糖标准溶液。

6.如权利要求5所述的酶法检测琼脂含量的试剂盒，其特征在于：所述β-琼脂糖酶浓度为25-150KU/L；稳定剂为糖类与醇类物质。

7.一种利用权利要求5中试剂盒进行琼脂定量检测的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）按照国标GB5009.88—2014方法，将样品进行脱脂、脱糖处理，在90-120℃下用缓冲溶液溶解得到样品液，放置于50℃中恒温待用；

（2）取一份样品液与等体积的校准品溶液，分别向其中加入试剂A，进行孵育，得到样品孵育液与校准品孵育液；

（3）分别向样品孵育液、校准品孵育液中加入试剂B与试剂C，孵育3-10min；完成孵育后迅速冷却至室温，以蒸馏水调零，分别测定吸光值，记为A1、A2；

（4）根据公式计算得知待测样品中琼脂含量g/L：

琼脂含量g/L= A1/A2×C标

上式A1为样品孵育液的吸光值，A2为校准品孵育液的吸光值，C标是校准品浓度g/L。

8.如权利要求7所述的进行琼脂定量检测的方法，其特征在于：步骤（2）的孵育步骤为取一份样品液与等体积的校准品溶液，分别向其中加入试剂A，放置于20-60℃下孵育5-60min，然后于90-120℃下孵育5-10min。