[发明专利]一种法尼基转移酶变体及其制备方法

权利要求书

1.一种法尼基转移酶变体，其特征在于，包括被修饰的法尼基转移酶α亚基和β亚基氨，其中，被修饰的法尼基转移酶α亚基序列结构从N端到C端依次包括A1-A2-A3，A1为His标签，A2为EVDDDDK酶切位点，A3为法尼基转移酶α亚基。

2.根据权利要求1所述的法尼基转移酶变体，其特征在于，A1为3～8个His标签，优选为6个His标签，核苷酸序列为Seq ID No.3，氨基酸序列为Seq ID No.4；A2为EVDDDDK酶切位点，核苷酸序列为Seq ID No.5，氨基酸序列为Seq ID No.6；A3为法尼基转移酶α亚基，核苷酸序列为Seq ID No.7，氨基酸序列为Seq ID No.8。

3.根据权利要求1所述的法尼基转移酶变体，其特征在于，被修饰的法尼基转移酶α亚基核苷酸序列为Seq ID No.1，氨基酸序列为Seq ID No.2。

4.根据权利要求1所述的法尼基转移酶变体，其特征在于，法尼基转移酶β亚基，核苷酸序列为Seq ID No.9，氨基酸序列为Seq ID No.10。

5.根据权利要求1所述的法尼基转移酶变体，其特征在于，所述变体的核苷酸序列包括SeqID No.1和Seq ID No.9，氨基酸序列包括Seq ID No.2和Seq ID No.10。

6.编码权利要求1所述的法尼基转移酶变体的基因。

7.一种包含权利要求6所述的基因的表达载体。

8.一种权利要求1所述的法尼基转移酶变体的制备方法，其特征在于，大肠杆菌作为表达宿主的可溶性表达方法，包括以下步骤：

(1)高密度发酵法尼基转移酶变体；

(2)收集菌体；

(3)破碎菌体；

(4)收集上清；

(5)Ni²⁺-NTA基质纯化上述法尼基转移酶变体；

(6)离子交换纯化法尼基转移酶变体；

(7)浓缩。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中的高密度发酵法尼基转移酶在发酵1.5-5小时OD₆₀₀为50-250进行诱导，诱导温度20-30℃；优选发酵3-5小时OD₆₀₀为150-250进行诱导；优选种子培养基，包含：12～15g/L胰蛋白胨(Typtone)，30～35g/L酵母提取物(Yeast Extraction)和4～6ml/L甘油；优选基础发酵罐培养基，包含：12～15g/L胰蛋白胨(Typtone)，30～35g/L酵母提取物(Yeast Extraction)和4～6ml/L甘油。

10.权利要求1～5任一项所述的法尼基转移酶变体、权利要求6所述的基因或权利要求7所述的表达载体在酶联反应中的应用。