[发明专利]一种分离的核酸分子及其应用

说明书

本申请涉及一种分离的核酸分子，其以5’至3’方向包含肝脏特异性表达调控元件以及与所述肝脏特异性表达调控元件可操作连接的目的基因，能增加所述目的基因在肝脏或肝细胞或者肝细胞来源的细胞系中的表达量。本申请还提供了一种包含所述分离的核酸分子的载体，诊断或药物组合物，及其应用。

技术领域

本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种分离的核酸分子。所述核酸分子包含肝脏特异性表达调控元件，能使目的基因在肝脏或肝细胞中的表达量增加。

背景技术

随着分子生物学的发展，基因疗法已经在实验和临床中用于治疗一系列病症和疾病，包括由于肝脏的蛋白合成功能障碍造成的相关疾病。由于肝脏所具有的蛋白翻译后的修饰功能使其成为基因治疗遗传性血液病的重要靶器官，肝脏基因疗法能将功能基因导入基因缺陷的个体并使其在体内长期高效表达。但目前限制肝脏基因治疗的主要因素是基因在肝脏内表达水平较低，造成低水平表达的原因之一是转录活性不强，为加强基因在体内的高水平表达，构建肝脏高效表达调控序列成为必需。

为了促进目的基因在宿主细胞中的表达，通常将目的基因包含在也含有表达目的基因所必需的各种调控元件的构建体中。这些调控元件可包括，例如，启动子、增强子、起始信号、终止信号和其他调节元件。理想的元件之间的共同作用不仅能促进目的基因在宿主细胞中的稳定表达，而且其表达水平足以实现其功能或活性。启动子以及其他调控元件决定了细胞类型的特异性、转导功效以及表达水平和持续时间。目的基因在宿主细胞中的稳定高效表达可能难以实现。因此，亟需开发有助于目的基因在宿主细胞(如肝脏细胞)中稳定且高效表达的核酸分子或载体。

发明内容

在一个方面，本申请提供了一种分离的核酸分子，其以5’至3’方向包含肝脏特异性表达调控元件以及与所述肝脏特异性表达调控元件可操作连接的目的基因，其中与使用核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示的表达调控元件相比，所述肝脏特异性表达调控元件使得所述目的基因在肝脏或肝细胞中的表达量增加至少100％。

在某些实施方式中，本申请所述的分离的核酸分子中所述肝脏特异性表达调控元件包含：

a)源自狗serpinA1基因的启动子或其功能性片段；

b)源自爪蟾卵黄蛋白原A2基因的启动子或其功能性片段；

c)源自爪蟾白蛋白基因的启动子或其功能性片段；以及

d)源自人serpinA1基因的启动子或其功能性片段。

在某些实施方式中，本申请所述的分离的核酸分子中所述源自狗serpinA1基因的启动子或其功能性片段包含SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

在某些实施方式中，本申请所述的分离的核酸分子中所述源自爪蟾卵黄蛋白原A2基因的启动子或其功能性片段包含SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。

在某些实施方式中，本申请所述的分离的核酸分子中所述源自爪蟾白蛋白基因的启动子或其功能性片段包含SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。

在某些实施方式中，本申请所述的分离的核酸分子中所述源自人serpinA1基因的启动子或其功能性片段包含SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。

在某些实施方式中，本申请所述的分离的核酸分子中所述肝脏特异性表达调控元件以5’至3’的方向依次包含：所述源自狗serpinA1基因的启动子或其功能性片段，所述源自爪蟾卵黄蛋白原A2基因的启动子或其功能性片段，所述源自爪蟾白蛋白基因的启动子或其功能性片段和所述源自人serpinA1基因的启动子或其功能性片段。

在某些实施方式中，本申请所述的分离的核酸分子还包含内含子，所述内含子位于所述肝脏特异性表达调控元件和所述目的基因之间。

在某些实施方式中，本申请所述的分离的核酸分子中所述内含子为SV40内含子或MVM内含子。