[发明专利]基于LAMP快速检测水稻恶苗病病原菌藤仓镰孢菌的引物组合物及方法

权利要求书

1.基于LAMP快速检测水稻恶苗病病原菌藤仓镰孢菌的引物组合物，其特征在于，包括：正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3、正向环引物LF和反向环引物LB；碱基序列如下：

FIP:5′-CTACCAAGGTAAGGTATCTGCTAAGTTGTTTGTCGGCTGATC-3′；

BIP:5′-GCTTCACTGGCCTTGGAGTCATAAGGTTTATGGAGACGCAC-3′；

F3:5′-TTGACAAAGTTCGGTGCC-3′；

B3:5′-TCTGACTTGATTCACAGATG-3′；

LF:5′-GGCGTTCATACCACGACCT-3′；

LB:5′-GTACGGTATCACCGTTGCATT-3′。

2.基于LAMP快速检测水稻恶苗病病原菌藤仓镰孢菌的试剂盒，其特征在于，包含如权利要求1所述的引物组合物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，包含：3.2mM正向内引物FIP和3.2mM反向内引物BIP；0.2mM正向外引物F3和0.2mM反向外引物B3；0.4mM正向环引物LF和0.4mM反向环引物LB。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包含：10×ThermoPol缓冲液、1.4mMdNTPs、0.8M甜菜碱、Bst DNA聚合酶和10000×染料。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系为25μl，包括：3.0μl 10×ThermoPol缓冲液、3.5μl 10mM dNTPs、4.0μl 5M甜菜碱、LAMP检测引物、2μlDNA模板、1.0μl Bst DNA聚合酶和0.25μl 10000×染料，超纯水定容；

其中LAMP检测引物包括：2.0μl 40mM正向内引物FIP、2.0μl 40mM反向内引物BIP；0.5μl 10mM正向外引物F3和0.5μl 10mM反向外引物B3；1.0μl10mM正向环引物LF和1.0μl 10mM反向环引物LB。

6.基于LAMP快速检测水稻恶苗病病原菌藤仓镰孢菌的方法，其特征在于，包括：

提取待测样品的基因组DNA，以提取的基因组DNA为DNA模板、如权利要求1所述的引物组合物为引物，进行LAMP反应；

所述LAMP反应的体系为25μl；包括：3.0μl 10×ThermoPol缓冲液、3.5μl 10mM dNTPs、4.0μl 5M甜菜碱、LAMP检测引物、2μl DNA模板、1.0μl Bst DNA聚合酶和0.25μl 10000×染料，超纯水定容；

其中LAMP检测引物包括：2.0μl 40mM正向内引物FIP、2.0μl 40mM反向内引物BIP；0.5μl 10mM正向外引物F3和0.5μl 10mM反向外引物B3；1.0μl 10mM正向环引物LF和1.0μl 10mM反向环引物LB；

所述LAMP反应的程序为：65℃反应55min。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括：根据反应液颜色变化判断检测结果。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述待测样品为水稻幼苗或水稻种子。