[发明专利]基因工程菌及其构建方法、应用,生产NAD+ 有效
申请号: | 201911326087.0 | 申请日: | 2019-12-20 |
公开(公告)号: | CN111394268B | 公开(公告)日: | 2021-06-18 |
发明(设计)人: | 王伟;王康林;付敏杰;金永红;田峰;贾和平;胡志浩 | 申请(专利权)人: | 合肥康诺生物制药有限公司;开封康诺药业有限公司 |
主分类号: | C12N1/19 | 分类号: | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/90;C12N15/55;C12N15/54;C12N15/52;C12P19/36;C12R1/865 |
代理公司: | 合肥市长远专利代理事务所(普通合伙) 34119 | 代理人: | 刘勇 |
地址: | 230000 安徽省合肥市长丰县*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基因工程 及其 构建 方法 应用 生产 nad base sup | ||
1.一种基因工程菌,其特征在于,菌株基因组上的腺嘌呤脱氨酶的编码基因被双敲除,或/和菌株基因组上整合有并超表达NAD+合成途径中的酶的编码基因;
所述菌株为二倍体酿酒酵母;
所述NAD+合成途径中的酶为烟酰酸磷酸核糖转移酶NPT1和烟酰酸单核苷酸腺苷转移酶NMA1。
2.根据权利要求1所述基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,保藏编号为CGMCC No. 19048。
3.一种如权利要求1或2述基因工程菌的构建方法,其特征在于,将宿主菌株基因组上的腺嘌呤脱氨酶的编码基因双敲除获得NAD+产量高的菌株;
或者分别构建NAD+合成途径中的酶的编码基因的表达框,接着将所述酶的编码基因的表达框整合于宿主菌株基因组上构建获得NAD+产量高的菌株;
或者分别构建NAD+合成途径中的酶的编码基因的表达框,接着将所述酶的编码基因的表达框整合于双敲除腺嘌呤脱氨酶的编码基因的宿主菌株基因组上构建获得NAD+产量高的菌株。
4.根据权利要求3所述基因工程菌的构建方法,其特征在于,所述整合为δ-位点整合法。
5. 根据权利要求4所述基因工程菌的构建方法,其特征在于,δ序列包含δ1片段和δ2片段,其中,δ1片段的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,δ2片段的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
6.一种如权利要求1或2所述基因工程菌在生产NAD+中的应用。
7.一种生产NAD+的方法,其特征在于,以烟酰胺和腺嘌呤作为底物利用权利要求1或2所述基因工程菌生产NAD+。
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