[发明专利]土霉素衍生物、制备方法及其检测方法

说明书

本发明公开了如结构式所示的土霉素衍生物，其制备方法以及检测其含量的方法，本发明利用多种高效液相制备色谱对土霉素水解物进行分离纯化，制得2种土霉素水解衍生物M390‑1和M390‑2，并对水样中土霉素水解衍生物的含量进行定量测定，确定其在水样中的浓度。为研究两种土霉素衍生物在环境样品中的浓度水平，评价土霉素对环境的影响提供准确的评估依据，进一步提高土霉素相关产品的质量标准，提高其安全性和可控性。

技术领域

本发明涉及药物技术领域，具体涉及一种四环素类抗生素(土霉素)的水解产物，以及该水解产物的制备方法、分离纯化方法以及分析检测方法。

背景技术

土霉素(Oxytetracycline，OTC)为淡黄色片或糖衣片，属于四环素类，可用于治疗立克次体病，包括流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、落基山热、恙虫病和Q热，支原体属感染和衣原体属感染等疾病。土霉素具有广谱抗病原微生物作用，为快速抑菌剂，高浓度时对某些细菌呈杀菌作用。其作用机制在于药物能特异性地与核糖体30S亚基的A位置结合，阻止氨基酰-tRNA在该位置上的联结，从而抑制肽链的增长和影响细菌或其他病原微生物的蛋白质合成，因此有着较为宽广的抗菌谱，不但对很多革兰阳性及阴性细菌有较强的抑杀作用，对某些立克次体、大型病毒和某些原虫也有抑制作用。土霉素对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、化脓性链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、大肠杆菌、产气杆菌、志贺菌属、耶尔森菌、单核细胞李斯特菌等有较强抗菌活性；此外，土霉素对立克次体、支原体、衣原体、放线菌等也有较强作用。土霉素对呼吸道感染及肠道感染均有相当疗效。土霉素控制阿米巴肠炎及肠道感染的效果胜过四环素、多西环素、美他环素、米诺环素等。畜用土霉素需要量很大，治“猪瘟”及“猪喘气症”的疗效比四环素为好。该类抗生素在防治某些畜禽疾病、促进动物生长方面获得良好效果。土霉素的结构如下。

已知水解是环境中药物降解的主要化学转化途径之一，温度和pH都是影响水解的重要因素。许多抗生素，如四环素，青霉素，红霉素和磺胺类药物，在水溶液中的稳定性较差，易于水解形成差向异构体和脱水产物。有研究针对土霉素建立了强化水解方法(85℃、pH＝7)以快速将其去除。目前针对土霉素水解产物的研究报道较少，已知且已有标样的水解产物仅有3种(EOTC(差向土霉素)、α-apo-OTC(α-阿卜土霉素)、β-apo-OTC(β-阿卜土霉素))，它们是土霉素的三种抗菌活性转化/降解产物，已经在土霉素降解过程的不同培养基中被鉴定出来。弱酸性和中性溶液特别有利于EOTC的形成和/或积累，EOTC可能转换回土霉素或者直接进一步降解。酸性和碱性pH条件特别有利于α-apo-OTC的形成，β-apo-OTC则在所有pH条件下均检测到较少量。α-apo-OTC、β-apo-OTC可能会进一步降解为ter-OTC(不可逆过程)，但这需要剧烈的酸性条件。OTC可以含有另一种独特的杂质，2-乙酰基-2-十甲酰氨基-土霉素(ADOTC)，作为发酵副产物存在。

由于土霉素相关产品研究较早，而目前有关土霉素的水解相关研究并未深入探究其水解产物，对于土霉素在强化水解中快速降解的机理尚未明了。现有的研究仅仅是探究土霉素的水解效果，而未对土霉素水解产物的组成以及产物组成成分的定性、含量定量检测研究，对土霉素生产后的污水的水解产物在环境中的浓度水平的定量研究较少，尤其是对土霉素水产物的分离、纯化；以其水解产物的浓度作为环境风险评估的研究更少。

发明内容

本发明的目的是针对现有对土霉素(OTC)水解产物，尤其是土霉素生产后的污水处理产物的组成成分以及水解产物的含量的定量研究中存在的技术问题，提供土霉素水解产物、制备方法及其检测的方法，本发明提供两种土霉素水解衍生物，利用超高液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)，在土霉素水解的过程中发现了两种全新的产物M390-1和M390-2，同时利用多种高效制备色谱对这两种产物进行分离纯化，从而得到了其纯品(纯度分别达98％、99％以上)，进一步即可对多种水样中的M390-1和M390-2物质进行定量检测，确定其具体浓度，探究这两种新发现的物质在环境样品中的浓度水平，以达到更好的环境风险评价。