[发明专利]OprJ-N-M融合基因及其融合蛋白、融合蛋白制备方法以及用途

说明书

本申请涉及生物技术领域，本申请提供一种OprJ‑N‑M融合基因及其融合蛋白、融合蛋白制备方法以及用途，该OprJ‑N‑M融合基因的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。通过动物实验验证，由该OprJ‑N‑M融合基因表达的OprJNM融合蛋白可以有效的刺激机体产生高水平的体液及细胞免疫应答和良好的抗绿脓杆菌的感染的免疫保护作用。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，特别是涉及一种OprJ-N-M融合基因及其融合蛋白、融合蛋白制备方法以及用途。

背景技术

绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa),又称铜绿假单胞菌，是一种普遍存在于环境中的革兰氏阴性菌。该菌为条件致病菌，是导致医院内复杂及持续感染的三大病原体之一。在正常人体内，绿脓杆菌可以与宿主维持共生关系互不侵扰，当宿主免疫力低下时，这种共生状态发生倾斜，绿脓杆菌大规模增殖，引发一系列的感染。比如，代谢性疾病、血液病和恶性肿瘤的患者，以及术后或烧烫的病人易感染本菌。绿脓杆菌感染的病灶可以导致血液散播，严重者可引起全身性败血症、脑膜炎或多器官衰竭，一旦发生败血症，其死亡率44％-81％，多器官衰竭达70％，整体死亡率高达50％。

由于绿脓杆菌天然耐药性及广谱抗生素的滥用，多重耐药绿脓杆菌感染频繁发生，尤其耐碳青霉烯类绿脓杆菌(CRPsA)在全球的快速播散及感染情况日益严重，已严重危害公共健康。

发明内容

本申请提供一种OprJ-N-M融合基因及其融合蛋白的制备方法和用途。通过动物实验验证，由该OprJ-N-M融合基因表达的OprJNM融合蛋白可以有效的刺激机体产生高水平的体液及细胞免疫应答和良好的抗绿脓杆菌的感染的免疫保护作用。

为解决上述技术问题，本申请采用的一个技术方案是：提供一种OprJ-N-M融合基因，所述OprJ-N-M融合基因的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。

为解决上述技术问题，本申请采用的另一个技术方案是：提供一种OprJNM融合蛋白，所述OprJNM融合蛋白是通过如权利要求1所述的OprJ-N-M融合基因表达而获得的，所述OprJNM融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

其中，所述OprJNM融合蛋白的氨基酸序列从N端到C端依次包括：绿脓杆菌外排泵蛋白MexCD-OprJ的结构域a、柔性连接体、绿脓杆菌外排泵蛋白MexEF-OprN的结构域b、柔性连接体、绿脓杆菌外排泵蛋白MexAB-OprM的结构域c；

其中，柔性连接体的氨基酸序列为AEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKALEAEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK。

其中，所述绿脓杆菌外排泵蛋白MexCD-OprJ的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；所述绿脓杆菌外排泵蛋白MexEF-OprN的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；所述绿脓杆菌外排泵蛋白MexAB-OprM的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

其中，所述绿脓杆菌外排泵蛋白MexCD-OprJ是通过OprJ基因表达而获得的，所述OprJ基因的碱基序列如SEQ ID NO:2所示；所述绿脓杆菌外排泵蛋白MexEF-OprN是通过OprN基因表达而获得的，所述OprN基因的碱基序列如SEQ ID NO:3所示；所述绿脓杆菌外排泵蛋白MexAB-OprM是通过OprM基因表达而获得的，所述OprM基因的碱基序列如SEQ ID NO:4所示。