[发明专利]一种基于CRISPR-Cas的大肠杆菌基因组编辑工具在审
| 申请号： | 201911291240.0 | 申请日： | 2019-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN112980891A | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 杨晟;陈飚;蒋宇;孙兵兵;杨俊杰 | 申请（专利权）人： | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/70;C12N9/22 |
| 代理公司： | 上海申浩律师事务所 31280 | 代理人： | 贾师英 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 crispr cas 大肠杆菌 基因组 编辑 工具 | ||
1.一种基于CRISPR-Cas的大肠杆菌基因组编辑工具，其包括用于表达核酸内切酶Cas9的质粒pEcCas，该质粒pEcCas包括cas9核酸酶基因、λ-RED重组系统基因、araC蛋白基因、sacB基因、复制子pSC101、鼠李糖调节蛋白RhaS/RhaR基因、用于将Cas9导向辅助质粒DNA序列的sgRNA序列。
2.如权利要求1所述的大肠杆菌基因组编辑工具，其特征在于，所述导向辅助质粒DNA序列的sgRNA序列的转录由L-鼠李糖诱导。
3.如权利要求1所述的大肠杆菌基因组编辑工具，其特征在于，所述导向辅助质粒DNA序列的sgRNA序列是位于鼠李糖启动子Prha下游的20nt的与靶序列互补的N20序列。
4.如权利要求3所述的大肠杆菌基因组编辑工具，其特征在于，所述N20序列为：5’-CTATCGTCTTGAGTCCAACC-3’(SEQ ID NO:2)。
5.如权利要求1-4中任一项所述的大肠杆菌基因组编辑工具，其特征在于，所述质粒pEcCas质粒还包含卡那霉素抗性基因kanR。
6.如权利要求5所述的大肠杆菌基因组编辑工具，其特征在于，所述质粒pEcCas的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。
7.如权利要求1所述的大肠杆菌基因组编辑工具，其特征在于，还包括辅助质粒，从而使大肠杆菌基因组编辑工具成为双质粒系统。
8.如权利要求7所述的大肠杆菌基因组编辑工具，其特征在于，所述辅助质粒选自pTargetF或pTargetT，该辅助质粒包含用于靶向大肠杆菌基因组的sgRNA序列、pMB1或P15A复制子。
9.如权利要求1-8中任一项所述的大肠杆菌基因组编辑工具在B系、K-12系大肠杆菌中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，用于B系或K-12系大肠杆菌的基因组编辑。
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