[发明专利]缺血性脑卒中溶栓治疗后出血转化风险评估相关基因序列的芯片及其试剂盒

说明书

本发明提供了缺血性脑卒中溶栓治疗后出血转化风险评估相关基因序列的芯片及其试剂盒。具体公开了捕获芯片中对应的变异位点，本发明的芯片可以一次性全面捕获缺血性脑卒中溶栓治疗后出血转化风险相关基因，检测效率高，覆盖性好。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种缺血性脑卒中溶栓治疗后出血转化风险评估相关基因序列的捕获文库及其构建方法。

背景技术

脑卒中是威胁人类健康的三大疾病之一,有很高的致残率、病死率和复发率,带来巨大的社会负担。最新的调查统计显示，我国目前约有700万脑卒中患者，约200万人/年新发，致死150万人/年，致残率高达75％以上，其中缺血性脑卒中超过80％，为中国成年居民第一死亡或致残原因。

美国食品和药物管理局(FDA)唯一批准用于急性缺血性卒中(acute ischemicstroke,AIS)治疗的药物是重组组织纤溶酶原激活剂(recombinant tissue plasminogenactivator,rtPA)，其治疗时间窗为在卒中症状出现后3至4.5小时。然而，美国国家神经病与卒中研究所(the National Institute of Neurological Disorders and Stroke,NINDS)研究表明rtPA治疗显著增加脑出血(intracranial hemorrhage,ICH)或出血转化(hemorrhagic transformation,HT)的发生率十倍以上。溶栓后症状性颅内出血(symptomatic intracranial hemorrhage,SICH)可加重神经功能障碍,增加病死率,这大大限制了溶栓治疗的临床应用，导致目前临床溶栓率在5％以下。目前，HT的发病机制尚不清楚，临床上急需合适的生物标志物来更好地预测HT的发生和严重程度。

再灌注早期血脑屏障(BBB)的破坏已被证明是溶栓治疗后导致HT的主要因素。血脑屏障由毛细血管内皮细胞的紧密连接、基底膜和胶质细胞足突组成。其中基底膜及间质内的细胞外基质对维持血脑屏障的完整性最为重要。脑缺血引起的内皮细胞变性坏死,溶栓后再灌注损伤以及二者继发的炎症反应和溶栓药物都能引起血脑屏障结构功能的改变。脑缺血再灌注后产生氧自由基并继发炎性因子及趋化因子释放,引起白细胞向内皮细胞移动和黏附,导致血管完整性破坏。RtPA引起再灌注微血管损伤通过产生活性氧(ROS),基质金属蛋白酶(MMPs),它们共同破坏神经血管单元，导致血脑屏障损伤。此外，rtPA可直接作用于内皮细胞、星形胶质细胞或中性粒细胞，激活PDGF-CC和MMP-2/3/9，从而破坏BBB功能。

目前临床上用于治疗和预防HT的方法还存在相当欠缺。降低ROS、抑制MMPs和调节影响血脑屏障通透性被作为研究的重点。然而，尽管许多化合物已被证明能降低动物体内的HT，但迄今为止还没有一种化合物被成功地转化到人类身上。研究表明，虽然早期抑制MMP-9可以降低动物的HT，但延迟或持续抑制MMP会加重脑损伤并恶化卒中结局。以ROS为靶点来降低HT,虽然初步研究显示有望降低动物体内的HT，但它未能降低卒中患者体内的HT。因此，临床上医生通过患者的临床因素来筛选是否进行溶栓治疗以尽可能减少HT的发生。许多临床因素与卒中患者的HT有关。脑卒中的严重程度和梗死面积是与HT关系最密切的因素之一。其他因素包括年龄增长、血糖升高、房颤、充血性心力衰竭、肾功能损害、抗血小板药物服用史、抗凝药物服用史等。然而，这些临床因素相对主观，并不能有效地减少HT的发生。因此，寻找新的方法来预测出血转化对缺血性脑卒中患者溶栓治疗相当有意义，甚至可以扩大溶栓治疗的时间窗，挽救更多患者的生命和提高他们的生存质量。