[发明专利]一种检测修复糖基化酶的生物传感器及其检测方法和应用在审
申请号: | 201911193670.9 | 申请日: | 2019-11-28 |
公开(公告)号: | CN110846385A | 公开(公告)日: | 2020-02-28 |
发明(设计)人: | 张春阳;王黎娟;逯莹莹 | 申请(专利权)人: | 山东师范大学 |
主分类号: | C12Q1/6844 | 分类号: | C12Q1/6844;C12Q1/34;C12N15/11 |
代理公司: | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人: | 郑平 |
地址: | 250014 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 修复 糖基化酶 生物 传感器 及其 方法 应用 | ||
1.一种检测修复糖基化酶的生物传感器,其特征在于,所述生物传感器包括茎环DNA模板以及线性引物探针;所述线性引物探针为LAMP引物探针,至少设置有4个引物探针,包括两个前正外内向引物即FIP和FOP,两个后正外内向引物BIP和BOP;
所述茎环DNA模板茎区设计有待测修复糖基化酶的目标碱基;所述茎环DNA模板还设置有与上述引物探针序列互补或者序列相同的区域。
2.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,所述修复糖基化酶,包括8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶、烷基腺嘌呤DNA糖基化酶、甲酰胺嘧啶DNA糖基化酶、尿嘧啶-DNA糖基化酶和胸腺嘧啶-DNA糖基化酶。
3.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,茎环DNA模板中环区设置有FOPc、F2c和F1区域;
茎环DNA模板中近5'端茎区设置有B1、B2和BOP区域。
4.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,当待测修复糖基化酶为hOOG1时,
所述茎环DNA模板序列如SEQ ID NO.1所示;
所述FIP引物序列如SEQ ID NO.2所示;
所述FOP引物序列如SEQ ID NO.3所示;
所述BIP引物序列如SEQ ID NO.4所示;
所述BOP引物序列如SEQ ID NO.5所示。
5.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,所述检测修复糖基化酶的生物传感器还包括DNA聚合酶,优选为Bst DNA聚合酶。
6.权利要求1-5任一项所述生物传感器在检测修复糖基化酶中的应用。
7.一种修复糖基化酶的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括:
将待测样品加入茎环DNA模板中混合孵育处理;
向孵育处理后的溶液中加入线性引物探针进行温育处理。
8.如权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述孵育处理条件具体为:在30~40℃下孵育30~60min;
所述温育处理条件具体为:在60~70℃下孵育30~60min。
9.如权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述检测方法还包括采用实时荧光测量和/或凝胶电泳对切除和扩增产物进行检测和分析。
10.权利要求1-5任一项所述生物传感器和/或权利要求7或8所述检测方法在修复糖基化酶相关药物筛选、生物样品酶分析中的应用;
所述修复糖基化酶相关药物包括修复糖基化酶抑制剂和修复糖基化酶激活剂;
所述生物样品包括生物的细胞。
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