[发明专利]对T细胞低敏感性的靶细胞及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201911168346.1 | 申请日： | 2019-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN110863015B | 公开（公告）日： | 2023-06-16 |
| 发明（设计）人： | 陈运凡;朱秀秀;徐艳敏;赵永春;齐亚男;赵文旭;陈军;黄霞;张茜真;张巍 | 申请（专利权）人： | 重庆精准生物产业技术研究院有限公司;重庆精准生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N5/10;C12Q1/18 |
| 代理公司： | 北京元本知识产权代理事务所(普通合伙) 11308 | 代理人： | 黎昌莉 |
| 地址： | 400000 重庆市九龙坡区二*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞 敏感性 靶细胞 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种对T细胞低敏感的靶细胞的制备方法，其特征在于，所述方法为通过破坏靶细胞表面的HLA表达，降低靶细胞对T细胞的敏感性；包括采用基因编辑技术敲除针对如SEQ IDNO：1所示的靶向序列，设计gRNA；所述gRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述靶细胞为SKOV3、Hela和K562。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法为以下步骤：
1)设计合成上下游引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3-4所示，退火成双链的gRNA；
2)酶切载体质粒，构建带gRNA的表达载体；
3)将步骤2中获得的表达载体转导靶细胞，获得对所述T细胞低敏感的靶细胞。
3.权利要求1-2任一项所述制备方法制备得到的对T细胞低敏感性的靶细胞，其特征在于，所述靶细胞为SKOV3、Hela和K562。
4.一种利用权利要求3所述的靶细胞体外评价CAR-T细胞有效性的方法，其特征在于，所述方法在于以下步骤：
1)分离T淋巴细胞并制备CAR-T细胞；
2)制备对T细胞低敏感的靶细胞；
3)铺板步骤2)的靶细胞并进行杀伤力检测。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，靶细胞为贴壁细胞，杀伤力采用ACEAxCELLigence RTCA MP仪器检测，细胞杀伤率＝基线电阻指数-实时电阻指数。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，靶细胞为悬浮细胞，
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