[发明专利]用于几种鲟鱼物种鉴定的SSR引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用

说明书

本发明涉及一种用于几种鲟鱼物种鉴定的SSR引物对组，其包括正向引物P4‑58F和反向引物P4‑58R，其中正向引物P4‑58F具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，反向引物P4‑58R具有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。本发明可以实现俄罗斯鲟、中华鲟、长江鲟、欧鳇和闪光鲟间的快速种间鉴定，且鉴定结果准确。

技术领域

本发明属于水产动物种质鉴定领域，具体涉及用于几种鲟鱼(俄罗斯鲟、中华鲟、长江鲟、欧鳇和闪光鲟)种间鉴定的SSR引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用。

背景技术

鲟鱼，即鲟形目鱼类，是古老的软骨硬磷鱼类。起源于白垩纪时期，迄今已有2亿年的历史，素有“水中活化石”之称。其骨可成胶、肉质细腻、味道鲜美，营养价值高，尤其是鲟鱼子酱富含优质蛋白质、氨基酸和微量元素，被誉为“黑色黄金”，与鹅肝、松露并称为世界三大美食。随着鲟鱼养殖业的快速发展，我国已经成为世界鲟鱼养殖第一大国。我国目前养殖的主要品种有俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、施氏鲟、达乌尔鳇以及它们的杂交种，其次有小体鲟、闪光鲟、匙吻鲟等，此外中华鲟和长江鲟也有保护性养殖，但未商品化。随着养殖品种的增多和对外贸易的法制化，纯种鲟鱼及相关副产品的鉴定迫在眉睫。

俄罗斯鲟等外来鲟和杂交鲟的大范围养殖，其逃逸到自然水体中的个体不仅可以存活，还可以与我国特有的中华鲟、长江鲟、施氏鲟等进行杂交繁殖，造成遗传污染。因此对鲟鱼种间鉴定鉴定不仅具有商业价值还具有重要的生态环境保护意义。然而，目前尚未建立简便、快速和有效的鉴定方法对俄罗斯鲟与其它鲟鱼，如中华鲟、长江鲟、欧鳇和闪光鲟的种间和相关的副产品的种质鉴定。

发明内容

本发明针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种用于几种鲟鱼(俄罗斯鲟、中华鲟、长江鲟、欧鳇和闪光鲟)种间鉴定的SSR引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用，其可以实现俄罗斯鲟与其他四种鲟鱼：中华鲟、长江鲟、欧鳇和闪光鲟的快速种间鉴定，且鉴定结果准确。

本发明为解决上述技术问题所提供的技术方案如下：

一方面，提供了一种用于几种鲟鱼物种鉴定的SSR引物对组，其包括正向引物P4-58F和反向引物P4-58R，其中正向引物P4-58F具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，反向引物P4-58R具有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

优选的，所述正向引物P4-58F可用荧光染料进行标记。

一方面，提供了一种用于几种鲟鱼物种鉴定的试剂盒，其包括上述SSR引物对组。

优选的，所述试剂盒还包括：水、PCR缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、上样缓冲液中的一种或多种。

一方面，提供了一种几种鲟鱼间的物种鉴定方法，其包括如下步骤：

S1、提取待鉴定的俄罗斯鲟、中华鲟、长江鲟、欧鳇和闪光鲟的DNA样本；

S2、合成如权利要求1所述的SSR引物对组，且利用所述SSR引物对组、以步骤S1中获取的DNA样本为模板进行PCR扩增；

S3、对经步骤S2获得的PCR扩增产物进行检测，以获得PCR扩增产物多态性原始数据；

以及S4、对PCR扩增产物多态性原始数据进行分析，以得出测序峰图数据，并根据所述测序峰图数据对俄罗斯鲟、中华鲟、长江鲟、欧鳇和闪光鲟进行鉴定。

优选的，在进行PCR扩增时，所述正向引物P4-58F的退火温度为52～60℃；所述反向引物P4-58R的退火温度为50～59℃。

优选的，在进行PCR扩增时，所述正向引物P4-58F与反向引物P4-58R的退火温度均为52℃。

一方面，还提供了一种上述SSR引物对组和/或上述试剂盒和/或上述鉴定方法在俄罗斯鲟、中华鲟、长江鲟、欧鳇和闪光鲟的种间鉴定/种质鉴定/家系管理中应用。