[发明专利]一种与西瓜节间长度连锁的CAPS标记引物组及其应用有效
| 申请号： | 201911121066.5 | 申请日： | 2019-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN110724755B | 公开（公告）日： | 2022-08-23 |
| 发明（设计）人： | 刘文革;赵胜杰;何楠;路绪强;朱红菊 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院郑州果树研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 西安嘉思特知识产权代理事务所(普通合伙) 61230 | 代理人： | 刘长春 |
| 地址： | 450000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 西瓜 节间 长度 连锁 caps 标记 引物 及其 应用 | ||
1.CAPS标记引物组在西瓜节间缩短性状育种中的应用，所述CAPS标记与西瓜节间长度连锁，酶切突变位点位于西瓜参考基因组第9号染色体第1859409bp处，多态性表现为A或G碱基，所述西瓜参考基因组是西瓜97103 V1版；
所述CAPS标记引物组包括正向引物F和反向引物R，所述正向引物F的核苷酸序列为5’CCCAAACCCCACCTCACTTT’3，所述反向引物R的核苷酸序列为5’ATACCAACAGGCACGTGGTT’3；
采用所述CAPS标记引物组以西瓜基因组DNA为模板进行PCR反应，得到PCR扩增产物，采用TaqI酶切所述PCR扩增产物，根据酶切产物的带型判断节间长度性状的等位基因型，其中，节间缩短纯合子酶切成638bp的条带，正常节间长度纯合子酶切成172bp和466bp的两条带，正常节间长度杂合子酶切成172bp、466bp和638bp的三条带。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PCR反应体系以20μL计，包括10μL 2×Taq PCR Master Mix，2μL模板DNA，正、反向引物各1μL和6μL ddH2O。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PCR反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸50s，30个循环；72℃延伸10min，4℃保存。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述酶切的反应体系以15μL计，包括0.3μL限制酶、1.5μL缓冲液、3.2μL ddH2O和10μL PCR产物。
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