[发明专利]一种制备普那卡纳肽的方法

说明书

本发明实施例公开了一种制备普那卡纳肽的方法，该方法为一种制备普那卡纳肽的新工艺路线。该工艺对序列中关键位置的半胱氨酸采用特殊的片段和结构，可以长距离地打破多肽序列的缩聚，使得其线性结构全固相大生产变为现实。按照这种方法得到的普那卡纳肽线性肽具有极高的纯度，其经过第一次环化和第二次环化，得到的粗品也具有很高的纯度，方便纯化，有利于商业化大生产的开展。

技术领域

本发明涉多肽药物制备技术领域，具体涉及一种制备普那卡纳肽的方法。

背景技术

多肽药物从诞生起就以其高活性、低毒性、具有良好的成药性而受到制药界的追捧，目前制约多肽药物上市的最大瓶颈是其商业化生产成本、质量与批量。

多肽的化学合成法分为固相合成、液相合成以及固液相结合的策略。固相合成因为其周期短、中间体不需要分离纯化而为业界广泛使用，但是固相合成长期受到多肽缩聚的困扰。所谓缩聚就是在多肽合成过程中肽链之间产生的氢键缔和，这种氢键的存在使得树脂发生团聚，反应位点因为被包裹而掩藏，反应活性大大降低。由于偶联时间延长，副反应呈倍数增长，其中最突出的副反应就是缺少氨基酸的杂质以及多氨基酸的杂质。由于这些杂质结构与最终产品只有一个氨基酸的差异，极难在最终产品的纯化过程中除去。

为了解决这个问题，已经有一些方式被使用在多肽合成中来解决缩聚问题，例如选用伪脯氨酸二肽，其已经在很多项目上得到使用并且能够解决很大的问题。但是由于伪脯氨酸二肽具有很小的保护官能团，其影响到的氨基酸序列个数非常有限，一般对其后的5-8个氨基酸产生解缩聚作用后，多肽又会恢复到缩聚状态。因此，对于多肽药物领域从业人员来说，找到一种更高效的解缩聚的方法就显得尤其迫切。

普那卡纳肽(Plecanatide)于2017年1月批准在美国上市，是一种由16个氨基酸组成的口服多肽，模拟人胃肠肽--尿鸟苷素，用于治疗慢性特发性便秘，该药物的基本结构为Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-Leu16-OH(Cys4Cys12：二硫桥；Cys7Cys15：二硫桥)，化学式如下。

原研厂家起初采用了经典的全固相合成方式，合成是从C段到N段，采用顺序偶联方式进行，但是由于从Gly14到Leu6之间有大量的非极性氨基酸存在，导致大量多肽缩聚现象的产生，从而使得整条多肽的偶联难以进行，特别是Leu6之后的氨基酸的偶联变得极其困难，收率低且杂质很多。

为了解决这个问题，原研公司改变了其合成方法，采取了更为复杂的工艺，将整个多肽序列分成三个片段：Asn1至Leu6作为片段一，Cys7至Gly14是片段二，Cys15至Leu16是片段三；其中片段一、片段二通过固相的方式合成，片段三通过液相方式合成，最终三个片段使用液相方法进行连接。这种工艺能够很好地规避纯固相合成的缩聚难题，拿到高质量的最终产品，但是该工艺路线非常繁琐，需要经过多步的中间体纯化及后处理，使得单批生产的周期很长，人员占用多，成本高。兼具了固相反应和液相反应的缺点。

发明内容

针对以上现有技术的不足，本发明提供了一种普那卡纳肽的全固相合成新方法，该方法显著地提高了产品的收率，缩短了整个合成的周期，降低了成本，加快了该药物的产业化。

为实现上述目的，本发明实施例提供一种制备普那卡纳肽的方法，所述方法包括下列步骤：

(1)合成Fmoc-(Dmp,DL)Cys-OH和Fmoc-Ala-(Dmp,DL)Cys-OH中间体；