[发明专利]翘嘴鳜雄性分子标记引物及其应用

说明书

本发明提供一种翘嘴鳜雄性分子标记引物，所述引物至少包括引物对1、引物对2中一种，所述引物对1包括Contig‑1上游引物和Contig‑1下游引物，所述引物对2包括Contig‑2上游引物和Contig‑2下游引物，其中Contig‑1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig‑1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，Contig‑2上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Contig‑1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。该引物可对翘嘴鳜的性别进行快速准确地鉴定。同时还提供一种鉴别翘嘴鳜鱼性别的方法，该方法耗时短，效率高。

技术领域

本发明属于水产生物技术领域中鱼类性别鉴定技术，具体涉及翘嘴鳜雄性分子标记引物及其应用。

背景技术

近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，已有多种鱼类的性别特异标记被开发出来，如尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)、虹鳟(Oncorhynchusmykiss)、黄颡鱼(Pelteobagrusfulvidraco)、半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)以及红鳍东方鲀(Takifugurubripes)等，但是这些标记主要是通过微卫星(microsatellite，SSR)、限制位点相关DNA(restriction site associated DNA，RAD)和扩增片段长度多态性(amplifiedfragment length polymorphism，AFLP)等分子标记开发技术获得，这些分子标记开发方法耗时长，工作量大，成功率低。而高通量测序技术的出现为分子标记开发提供了一种新的高效手段，目前通过高通量测序的方法已成功开发出乌鳢及大黄鱼性别特异分子标记。

翘嘴鳜(Sinipercachuatsi)，属于鲈形目(Perciformes)，鳜科(Sinipercidae)，鳜属(Siniperca)，俗称鳜鱼、桂花鱼，其英文名意为中国鲈(Chinese perch)、满洲鱼(Mandarin Fish)。翘嘴鳜为我国特有淡水名贵鱼类，其肉质鲜美，营养丰富，无肌间刺，深受国内外消费者喜爱。翘嘴鳜的生长过程呈性别二态性，同龄商品鱼，雌鱼的体重比雄鱼大约10-20％，因此翘嘴鳜全雌单性育种具有更高的经济效益。

尽管以往的染色体核型分析并没有发现明显的性染色体，但我们通过对雌雄基因组测序分析，发现雄性基因组有许多特异DNA片段，因此推测鳜鱼性别决定为雄性异配。而全雌鳜单性育种首先需要得到伪雄鱼，获得伪雄鱼的主要通过遗传雌鱼诱导性逆转的途径获得。而传统的方法是通过测交实验来判别父本的性染色体组成，即是XX伪雄鱼还是正常XY雄鱼。鳜鱼很难从外部形态上区分性别，而通过解剖识别性腺也至少需要三个月，且测交亲本单独养殖需要占用较多养殖资源，所以用测交的方法耗时，费力又费资源。迄今为止，国内外尚无能够成功鉴定翘嘴鳜遗传性别的分子标记的报道，因此，开发一种准确鉴定遗传雄性的分子标记在翘嘴鳜全雌育种中具有极大的生产应用价值。

发明内容

本发明第一目的在于提供翘嘴鳜雄性分子标记引物，该引物能在分子水平上鉴别雄性翘嘴鳜。

本发明第二目的在于提供一种翘嘴鳜鱼性别鉴定的方法，该方法耗时短，检测结果准确。

本发明第三目的在于提供一种翘嘴鳜雄性分子标记引物进行翘嘴鳜鱼全雌性育种的应用。

为实现上述第一目的，本发明采用以下技术方案：

一种翘嘴鳜雄性分子标记引物，所述引物至少包括引物对1、引物对2中一种，所述引物对1包括Contig-1上游引物和Contig-1下游引物，所述引物对2包括Contig-2上游引物和Contig-2下游引物，其中Contig-1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig-1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，Contig-2上游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO：3所示，Contig-1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。