[发明专利]一种生产海藻糖的基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种生产海藻糖的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是蓝细菌过表达麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase基因和麦芽寡糖基海藻糖水解酶MTHase基因获得的；所述蓝细菌是聚球藻；

所述MTSase基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述MTHase基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌还过表达海藻糖转运蛋白TRET1基因；

所述TRET1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述聚球藻是聚球藻PCC7942或聚球藻Sye7942-C252Y。

4.一种权利要求1-3任意一项所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：

(1)构建携带有MTSase与MTHase基因的重组质粒；

(2)将步骤(1)所得的重组质粒导入宿主菌中，获得基因工程菌，所述宿主菌为蓝细菌。

5.根据权利要求4所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，还包括构建携带有TRET1基因的重组质粒的步骤，并将所述的携带有TRET1基因的重组质粒与所述的携带有MTSase与MTHase基因的重组质粒全部导入到宿主菌中，获得基因工程菌。

6.根据权利要求4所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述的重组质粒中MTSase与MTHase基因通过P3连接肽基因连接的，所述P3连接肽基因如SEQ ID NO.16所示。

7.权利要求1-3任一所述的基因工程菌在生产海藻糖上的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述生产海藻糖具体步骤如下：

(1)基因工程菌的培养：对基因工程菌在柱式光反应器中进行培养，接种浓度OD₇₃₀为0.1，培养温度为28-30℃，光强为100-200μmolphotons m^-2s^-，培养所用气体为3％CO₂与97％空气的混合气；

(2)转运蛋白TRET1诱导表达：步骤(1)中的工程菌培养至第4天，添加异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转运蛋白TRET1的表达，添加IPTG诱导24小时后即可分离提纯海藻糖。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(1)所述培养是在不含抗生素的BG11培养基中培养，培养温度为30℃，光强为150μmolphotons m^-2s^-1。