[发明专利]一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的引物探针组合物，其特征在于，所述引物序列如下：

上游引物：5’-TACGATCGATGATGTAGTGGTGGGTGGGTGGTTG-3’；SEQ ID NO.1；

下游引物：5’-TAGCGACATAGCCGCCAAATTATCATCACCATC-3’；SEQ ID NO.2；

所述探针在SEQ ID NO.3所示序列的第31位碱基修饰荧光报告基团，第33位碱基修饰淬灭基团，第32位碱基修饰四氢呋喃残基；

5’-TGTGATCAACAACGAGAAACCACCAACACATATACACGTTCACCTAGT-3’；SEQ ID NO.3。

2.根据权利要求1所述的一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的引物探针组合物，其特征在于，所述荧光报告基团包括FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5。

3.根据权利要求1所述的一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的引物探针组合物，其特征在于，所述淬灭基团包括TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL。

4.一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的引物探针组合物、RAA基础荧光通用反应试剂、反应缓冲液、阴性质控品、阳性质控品和临界阳性质控品。

5.根据权利要求4所述的一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括引物探针组合物40～80μL，所述上游引物和下游引物的浓度分别为0.03～0.07mM，所述探针浓度为0.01～0.03mM；RAA基础荧光通用反应试剂24管冻干粉；反应缓冲液1000～1800μL；阴性质控品25～35μL；浓度为1.0×10^4～8copies/μL的阳性质控品；浓度为1.0×10^1～5copies/μL的临界阳性质控品。

6.根据权利要求4或5所述的一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的试剂盒，其特征在于，所述阴性质控品为ddH₂O。

7.根据权利要求6所述的一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的试剂盒，其特征在于，所述阳性质控品和临界阳性质控品均为含有广州管圆线虫DNA片段的质粒；所述广州管圆线虫DNA片段的序列如SEQ ID NO.4所示。

8.根据权利要求7所述的一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液包括：450～550mM的Tris-HCl，200～300mM的MgAc和质量体积百分含量为5～15％的PEG10000。

9.根据权利要求8所述的一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的试剂盒，其特征在于，所述RAA荧光法的反应体系为50μL；包括47μL反应缓冲液，2μL引物探针组合物，1μL样品、阴性质控品、阳性质控品或临界阳性质控品。

10.根据权利要求8所述的一种RAA荧光法检测广州管圆线虫的试剂盒，其特征在于，所述RAA荧光法的反应条件为：反应温度为25～42℃，反应时间为15～25min。