[发明专利]一种用于人乳头瘤病毒分型检测的试剂盒

说明书

本发明属于人乳头瘤的诊断试剂技术领域，具体涉及一种用于人乳头瘤病毒分型检测的试剂盒及检测方法。所述试剂盒包括引物探针预混液；所述引物探针预混液包括检测16，18，52，58型HPV的上下游引物、分别检测16，18，52，58型HPV的荧光探针、检测人actb基因的上下游引物和检测人actb基因的荧光探针。本发明提供的试剂盒在通用引物中加入了简并碱基，提高不同分型HPV的覆盖度，有效做到不漏检。在荧光探针中加入锁核酸设计，提高检测特异性；在保证反应高效准确的前提下极大提高了芯片进孔效率，使用热启动的DNA聚合酶和UDG酶，降低反应假阳性。

技术领域

本发明属于人乳头瘤的诊断试剂技术领域，具体涉及一种用于人乳头瘤病毒分型检测的试剂盒及检测方法。

背景技术

人乳头状瘤病毒(Human Papilloma Virus,HPV)属于乳头瘤病毒属，是一种特异性感染皮肤或粘膜复层上皮的病毒。HPV是一种双链DNA病毒，基因组大小约为8000对碱基。

目前已经确定的HPV类型超过120种，在临床上根据其致癌的风险不同分为高危型和低危型。低危型与性传播疣或尖锐湿疣有关，一般不诱发癌变，常见的低危型为6、11、44、81等；高危型的感染则是子宫颈癌及子宫上皮内瘤变发生的必要条件，常见的高危型有16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68等。而我国较流行的除了16和18型外，还有58和52型。

1、HPV与宫颈癌的关系：

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，全世界每年宫颈癌的新发病例大约500000，是除乳腺癌之外威胁女性生命健康的第二大恶性肿瘤。导致宫颈癌的发病的因素很多，但其中99.7％都与高危型HPV的反复感染有关。因此，HPV普查对于宫颈癌的预防，早期发现及治疗都具有重要的意义。

2、HPV检测方法及缺陷：

由于HPV至今尚不能在体外培养，又无合适的实验动物，因而对其检测主要依赖于形态学鉴定和分子生物学检测技术。目前已经在临床中应用的HPV检测方法主要包括如下几大类：细胞病理学检查，组织学检查，免疫学检查和分子生物学检查等。

细胞学检查包括传统巴氏涂片(CV)、液基薄层细胞学技术(TCT)、自动细胞学检测系统(CT)等。该方法优点：操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查；缺点：凹空细胞是HPV感染的主要形态学改变，但由于其他病毒感染及人为因素均有可能造成细胞内出现空泡或凹空样变，而且细胞学检查易受取材、染色及细胞病理医生的主观判断等因素的影响，因此应用细胞病理学检测HPV存在灵敏度低、特异性差、假阴性率和假阳性率高、不能对HPV进行分型。

组织学检查包括肉眼观察；阴道镜观察；组织检查。该方法优点：操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查；缺点：准确率低，人员素质要求高，病人痛苦程度大，心里抵触不愿意配合检查。

免疫组化检查包括ELISA，免疫沉淀法等。该方法优点：原理明确，操作相对简单；缺点：血清学检测的对象是抗原和抗体，由于人体对HPV产生免疫应答有一定的迟滞性，所以血清学检测对无免疫应答者和HPV潜伏期感染者会产生漏检。

随着分子生物学技术的发展，通过检测HPV-DNA的方法来鉴别HPV感染类型在临床上的应用越来越广泛。具体可以分为三类：

第一类是直接探针结合法，如有HPV类型特异性探针的Southern印迹和点印迹，原位杂交过滤(FISH)等法，由于其低灵敏度、操作繁琐费时及需要大量纯化的探针，现已很少采用。