[发明专利]一种用于预测免疫检测点调节类药物疗效的RT-PCR试剂盒及其预测方法

说明书

本发明公开了一种用于预测免疫检测点调节类药物疗效的RT‑PCR试剂盒及其预测方法。该试剂盒包括用于进行RT‑PCR扩增的引物及其辅助成分；所述引物包括首轮RT‑PCR扩增引物，以及对首轮扩增产物TCR区域进行第二轮扩增的特异性引物；首轮RT‑PCR扩增引物如SEQ ID NO.1～40所示；第二轮扩增引物如SEQ ID NO.41～50所示。本发明基于高通量测序技术和目标区域特异性扩增技术，从受试者外周血分离淋巴细胞，提取RNA，逆转录获得cDNA，利用特异性引物扩增TCR可变区域，获得其序列信息，评估其多样性。实现了使用很少量外周血样本，在基因分子水平，对免疫检测点调节类药物疗效的预测评估。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种用于预测免疫检测点调节类药物疗效的RT-PCR试剂盒及其预测方法。

背景技术

免疫系统的一个重要功能是分辨自体正常细胞和外来/异常的细胞，从而在保留正常细胞的同时攻击外来/异常细胞。为了避免误伤，人体的T细胞在被激活的同时会表达某些有“免疫检测点”功能的蛋白，例如PD1、CTLA4。如果某个细胞的表面有与之匹配的蛋白，则能够解除T细胞对该细胞的攻击性，例如PD-L1/PD-L2结合PD-1、CD80/CD86结合CTLA-4。某些癌细胞可以表达这样的匹配信号蛋白，从而避免被免疫系统攻击。

免疫检测点调节类药物，通过阻断检测到的癌细胞表面和其配型蛋白的结合，从而解除癌细胞的免疫逃逸。目前已有多种免疫检测点调节类药物上市，如靶向PD-1的派姆单抗PembrolizμMab(Keytruda)、纳武单抗NivolμMab，靶向PD-L1的阿特朱单抗AtezolizμMab(Tecentriq)、AvelμMab(Bavencio)、DurvalμMab(Imfinzi)，以及靶向CTLA-4的药物伊匹单抗IpilimμMab(Yervoy)。

为了预测免疫检测点调节类药物对肿瘤的疗效，目前已有的方法有(以PD-1为例)：

1、取得肿瘤组织切片，使用免疫组化方法检测癌细胞表面PD-L1的表达量。这种方法的缺陷是：1)取得肿瘤组织必须进行穿刺或者做微创手术，部分病人不愿意配合，也会增大肿瘤扩散风险；2)无法预测患者免疫系统对药物的反应，因此即使癌细胞表达PD-L1，免疫检测点调节类药物也只对约20％患者有效，预测准确度不高。

2、取得肿瘤组织切片，使用免疫组化方法检测DNA错配修复缺陷(dMMR)，或用基因检测法检测微卫星不稳定性(MSI)或肿瘤突变负荷(TMB)。这种方法的缺陷是：1)必须进行穿刺或者做微创手术；2)无法预测患者免疫系统对肿瘤突变是否产生反应，因此即使dMMR、MSI或TMB检测值较高，免疫检测点调节类药物也只对少数患者有效，预测准确度不高。

3、取得肿瘤组织切片，使用免疫组化方法检测肿瘤组织中浸润的淋巴细胞的数量和类型。这种方法的缺陷是：1)必须进行穿刺或者做微创手术；2)无法预测患者免疫系统对肿瘤的反应程度，因此即使检出较高数量肿瘤浸润淋巴细胞且检出PD-1表达，免疫检测点调节类药物也只对少数患者有效，预测准确度不高。

4、采集患者血液进行基因检测，检测循环肿瘤DNA(ctDAN)和循环肿瘤细胞(CTC)。这种方法的缺陷是：无法预测患者免疫系统对肿瘤的反应程度，ctDNA和CTC更多只是反映了当时肿瘤的进展，对免疫检测点调节类药物疗效的预测准确度不高。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种用于预测免疫检测点调节类药物疗效的RT-PCR试剂盒及其预测方法，可有效解决现有方法无法预测免疫检测点调节类药物对肿瘤的疗效的问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：