[发明专利]基于Cytb基因鉴别裸盖鱼的引物和探针以及方法

权利要求书

1.基于Cytb基因鉴别裸盖鱼的引物和探针，其特征在于：

所述引物包括一对扩增引物，分别包括SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，

所述探针包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，且所述探针的5’端携带有荧光报告基团，3’端携带有荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的基于Cytb基因鉴别裸盖鱼的引物和探针，其特征在于：所述荧光报告基团是FAM，所述荧光淬灭基团是DNA小沟结合物。

3.根据权利要求1所述的基于Cytb基因鉴别裸盖鱼的引物和探针，其特征在于：所述荧光报告基团是FAM，所述荧光淬灭基团是DNA小沟结合物，所述DNA小沟结合物的3’端连接有二氢环化吲哚卟啉-三肽。

4.一种鉴别裸盖鱼的方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤(1)：基于所述裸盖鱼的Cytb基因设计并合成引物和探针；

步骤(2)：从待检样品中提取DNA；以及

步骤(3)：利用所述引物和所述探针，以所述DNA作为模板DNA，通过实时荧光PCR反应来鉴定所述裸盖鱼。

5.根据权利要求4所述的鉴别裸盖鱼的方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述引物包括一对扩增引物，分别包括SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，所述探针包括SEQID No.3所示的核苷酸序列，且所述探针的5’端携带有荧光基团，3’端携带有荧光淬灭基团。

6.根据权利要求5所述的鉴别裸盖鱼的方法，其特征在于：所述荧光基团是FAM，所述荧光淬灭基团是DNA小沟结合物。

7.根据权利要求4所述的鉴别裸盖鱼的方法，其特征在于：

在步骤(2)中，以水产品的肌肉组织为待检样品进行DNA提取，以浓度为10ng/μL～100ng/μL且A₂₆₀/A₂₈₀比值在1.7～1.9范围内的DNA作为所述模板DNA。

8.根据权利要求4所述的鉴别裸盖鱼的方法，其特征在于：

在步骤(3)中，所述实时荧光PCR反应的条件为：95℃10min；95℃15s，60℃1min，并收集荧光信号，循环40次。

9.一种用于鉴别裸盖鱼的实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括一对扩增引物以及探针，所述一对扩增引物分别具有SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，所述探针具有SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，且所述探针的5’端携带有作为荧光报告基团的FAM，3’端携带有作为荧光淬灭基团的DNA小沟结合物。

10.根据权利要求9所述的实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括：含有裸盖鱼成分的阳性对照品，不含有裸盖鱼成分的阴性对照品。