[发明专利]一种甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法

说明书

本发明公开了一种甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法，先取甘蔗梢腐病病原菌株在PDA培养基上活化；然后将杀菌剂配置母液，再稀释成浓度梯度的药液，取2ml不同稀释浓度的药液分别加入98ml PDA培养基中，混匀后分装于培养皿中，冷却后即可得含药平板，以无药平板为对照；用打孔器在活化好的甘蔗梢腐病病原菌菌落边缘打取菌饼，将菌饼转接于含药平板中央，放置于28℃恒温培养箱中培养；培养完成后，以菌饼为中心在平板底部画线，测量菌落直径，测定杀菌剂抑制率，计算EC₅₀；再筛选出EC₅₀≤30mg/L的杀菌剂或者复配杀菌剂进行田间防治试验。本发明实现了离体条件下快速、有效筛选出对甘蔗梢腐病病原菌有效的杀菌剂，具有筛选周期短，操作简单，成本低的优点。

技术领域

本发明属于植物杀菌剂技术领域，具体是涉及筛选有效杀菌剂的方法。

背景技术

甘蔗(Saccharum officinarum L.)是最主要的糖料作物之一。我国作为世界第三大蔗糖生产国，蔗糖总产量达到1367.9万t/年，占全国食糖总产量的92.2％以上，可见甘蔗生产对国民经济的可持续发展具有重要意义。然而，甘蔗生产长期受到病害的影响，严重影响了甘蔗蔗茎产量以及蔗糖分，对蔗糖产业造成了巨大损失，严重阻碍了蔗糖产业的可持续发展。甘蔗梢腐病是甘蔗伸长期最主要的一种真菌性病害，该病主要发生在高温高湿的7-9月份，易感病品种发病率高达70％-90％，抗病品种发病率也有5％-30％。该病最早发现于爪哇，随后迅速传播，目前几乎遍及所有甘蔗生产国和地区，已发展成为一种世界性真菌病害。甘蔗梢腐病病原菌主要通过气流传播到甘蔗心叶侵染为害，造成叶片死亡，植株生长受阻，严重可造成植株死亡，导致甘蔗减产5％-20％，甘蔗糖分降低3％，对感病甘蔗品种造成的影响更加显著。我国各甘蔗生产区均有发生梢腐病危害，近几年，甘蔗梢腐病在我国广大蔗区呈现出了逐渐加重的趋势，严重影响了当季甘庶产量和庶糖分，阻碍了甘庶产业的可持续发展。

目前，利用杀菌剂防治甘蔗梢腐病是最快捷、最有效的措施，而杀菌剂的选择对梢腐病的防治效果起决定性作用。目前，对于杀菌剂的筛选试验一般采用活体植株法，即在实验大棚中布置桶栽实验，种植经不同杀菌剂处理的甘蔗种茎，在甘蔗苗3-4片叶时接种梢腐病病原菌，10天后调查梢腐病发病率，计算田间人工接种条件下各杀菌剂处理的防治效果；该方法存在着测定周期长、影响因素多、工作量大等弊端。而对于离体条件下甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法尚未见有相关报道。因此，迫切的需要建立一种快速、准确和有效的杀菌剂对甘蔗梢腐病病原菌的毒力检测方法，以确定和比较不同杀菌剂对甘蔗梢腐病病原菌的抑菌效果和毒力，为进一步的田间药效试验和混配药剂的研制提供理论依据，

发明内容

本发明的目的是提供一种离体条件下快速、有效甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法，包括以下步骤：

(1)病原菌株活化：取保存于实验室中的甘蔗梢腐病病原菌株接种于含有氨苄青霉素的PDA培养基中，放置于28℃恒温培养箱中培养5天；

(2)含药平板的配置：用无菌水将拟进行筛选的杀菌剂配置成10-15g/L的母液，再用无菌水稀释成6个浓度梯度的药液，取2ml不同稀释浓度的药液分别加入98ml冷却至

50-55℃PDA培养基中，充分混匀后分装于5个培养皿(Φ＝9cm)中，冷却后即可得含药平板，以无药平板为对照；

(3)接种：用打孔器(Φ＝5mm)在活化好的甘蔗梢腐病病原菌菌落边缘打取菌饼，将菌饼转接于含药平板中央，每个处理5次重复，放置于28℃恒温培养箱中培养4-5天；

(4)抑制数据测定：培养结束后，以菌饼为中心在平板底部画两条垂直线，用直尺沿垂直线测量菌落直径，取平均值，测定杀菌剂抑制率，计算EC₅₀；