[发明专利]一种甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法

权利要求书

1.一种甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)病原菌株活化：取甘蔗梢腐病病原菌株接种于含有氨苄青霉素的PDA培养基中，放置于28℃恒温培养箱中培养5天；

(2)含药平板的配置：用无菌水将拟进行筛选的杀菌剂配置成10-15g/L的母液，再用无菌水稀释成6个浓度梯度的药液，取2ml不同稀释浓度的药液分别加入98ml冷却至50-55℃PDA培养基中，充分混匀后分装于5个培养皿中，冷却后即可得含药平板，以无药平板为对照；

(3)接种：用打孔器在经过步骤(1)活化好的甘蔗梢腐病病原菌菌落边缘打取菌饼，将菌饼转接于含药平板中央，放置于28℃恒温培养箱中培养4-5天；

(4)抑制数据测定：培养结束后，以菌饼为中心在平板底部画两条垂直线，用直尺沿垂直线测量菌落直径，取平均值，测定杀菌剂抑制率，计算EC₅₀；

(5)根据步骤(4)计算出来的EC₅₀，筛选出EC₅₀≤30mg/L的杀菌剂或者复配杀菌剂进行田间防治试验。

2.根据权利要求1所述的甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法，其特征在于：所述含有氨苄青霉素的PDA培养基中含100μg/ml氨苄青霉素。

3.根据权利要求1或2所述的甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法，其特征在于：所述含有氨苄青霉素的PDA培养基的配制是先按照PDA培养基配方配制，灭菌后冷却至50-55℃再添加100μg/ml的氨苄青霉素。

4.根据权利要求1所述的甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法，其特征在于：所述含有氨苄青霉素PDA培养基均需121℃高压灭菌20min后使用；所述培养皿需经121℃高压灭菌20min后使用。

5.根据权利要求1所述的甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法，其特征在于：所述步骤(3)接种过程中，选用孔径为5mm打孔器在活化好的甘蔗梢腐病病原菌菌落边缘打取菌饼，将菌饼转接于含药平板中央，每个处理5次重复。

6.根据权利要求1所述的甘蔗梢腐病病原菌有效杀菌剂的筛选方法，其特征在于：所述打孔器需经过酒精灯灼烧灭菌，冷却后方可使用。