[发明专利]一株里氏木霉及其培养方法与应用

权利要求书

1.一株里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007，2019年6月14日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号CGMCC No.17970，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

2.权利要求1所述的里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007的培养方法，包括步骤如下：

(1)取里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007接种于PDA培养基中，在24℃～28℃的条件下，活化培养12～24h，制得活化菌株；

(2)取步骤(1)制得的活化菌株，接种于种子培养基中，在24℃～28℃的条件下，增殖培养24～36h，制得种子液；

(3)取步骤(2)制得的种子液，按体积比1～10％的比例接种于发酵培养基中，在24℃～28℃，扩大培养24～36h，即得菌体发酵液。

3.根据权利要求2所述的里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中的种子培养基原料组分如下：

去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，KH₂PO₄ 3g，MgSO₄·7H₂O 1.5g；将上述组分混合后加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。

4.根据权利要求2所述的里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007的培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中的发酵培养基原料组分如下，均为重量百分比：

玉米芯25％，葡萄糖4％，牛肉膏6％，蛋白陈1％，无水硫酸镁0.01％，磷酸氢二钾0.02％，硫酸铵0.02％，余量水，pH＝5.0～6.0。

5.根据权利要求2所述的里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中的PDA培养基原料组分如下：

马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，琼脂15.0g；

马铃薯提取液按如下方法制备：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。

6.权利要求1所述的里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007在制备木聚糖酶中的应用。

7.根据权利要求6所述的里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007的应用，其特征在于，应用步骤如下：

取上述制备的菌体发酵液经离心分离，洗涤菌体，二次离心，保留沉淀物，即为木聚糖酶粗酶制剂。

8.根据权利要求7所述的里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007的应用，其特征在于，洗涤菌体采用pH＝8.0、浓度50mmol/L的Tris-HCl缓冲液，然后经离心分离，保留沉淀，制得粗酶制剂。

9.根据权利要求7所述的里氏木霉(Trichoderma reesei)BLCY-007的应用，其特征在于，离心分离均为在4℃、10000r/min条件下，离心10min。

10.权利要求6所述的木聚糖酶在制备低聚木糖中的应用。