[发明专利]一种野菊花药材质量评价方法及应用

权利要求书

1.一种野菊花药材质量评价方法，包括指纹图谱法和模式识别法，其特征在于：还包括一测多评法，构建野菊花药材的指纹图谱，模式识别法分析不同产地野菊花药材聚类趋势，以绿原酸为内参物，一测多评法明确野菊花药材指纹图谱中12个特征组分位置及含量；所述野菊花药材指纹图谱中12个特征组分为5-咖啡酰奎宁酸、绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、蒙花苷、木犀草素、芹菜素、金合欢素；

所述构建野菊花药材的指纹图谱，包括以下步骤：

步骤（1）制备混合对照品溶液：对12种特征组分分别称取5-咖啡酰奎宁酸、绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、蒙花苷、木犀草素、芹菜素、金合欢素适量，加溶剂溶解，制得混合对照品原液，然后量取1、2、4、6、8、10 mL混合对照品原液于10 mL棕色量瓶中，用上述溶剂定容至刻度，混合均匀，得到系列浓度混合对照品溶液，4 ℃避光存储；

步骤（2）制备供试品溶液：取不同产地的野菊花药材粉末约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂100ml，称定重量，回流1~3小时，再称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀，过0.45μm 滤膜，置于1.5 mL进样小瓶，备测；

步骤（3）采用高效液相色谱对所述混合对照品溶液和供试品溶液分别进行检测，并记录混合对照品溶液的指纹图谱和供试品溶液的指纹图谱；

步骤（4）建立对照指纹图谱：将所述步骤（3）中供试品溶液的指纹图谱数据加载到中药色谱指纹图谱相似度评价系统，2012年版，以开始时间为0，结束时间为55对指纹图谱进行数据剪切，以S1为参照图谱，时间窗宽度设置为0.01，中位数法生成对照指纹图谱，经多点校正，峰匹配，生成对照指纹图谱；

所述模式识别法包括相似度分析、主成分分析及聚类分析法，具体操作步骤为：

步骤a、相似度分析为计算不同产地野菊花药材指纹图谱之间的相似度以及与对照指纹图谱的相似度；

步骤b、主成分分析为对不同产地野菊花药材指纹图谱进行主成分分析，两个主成分累计贡献达到80.92%，包含了大部分信息，其中第1主成分贡献率为71.66%，第2主成分特征值为 9.26%，以第1、2主成分进行投影，得到主成分投影图；

步骤c、聚类分析为对不同产地野菊花药材的指纹图谱数据进行聚类分析；

所述一测多评法为取上述步骤（1）中混合对照品原液1、5、10、15、20、25 μL进样注入高效液相色谱仪，分别记录不同进样体积时12个特征组份的峰面积，选择步骤（1）中的12个特征组分中的一种为内参物，按公式 f_s/i= f_s /f_i = (W_i×A_s) / (W_s×A_i) ，式中A_s为内参物峰面积，W_s为内参物的量，A_i为组分i的峰面积；W_i为组分i的量，分别计算5-咖啡酰奎宁酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、蒙花苷、木犀草素、芹菜素、金合欢素的相对校正因子，用校正因子计算12个组份的含量；

步骤（3）中所述高效液相色谱的检测条件是采用C₁₈为填充剂，流动相为有机相~水相，进行梯度洗脱，检测波长334 nm，柱温35℃，进样量10µL；

所述梯度洗脱的程序为：0～5min，5～30min，30～32min，32～42min，42～45min，45～45.01min，45.01～50min，50～50.01min，50.01～58min，有机相的体积百分比分别为5～18%，18～21%，21～38%，38～45%，45～60%，60～80%，80～85% ，85～5%，保持5%；

所述流动相的流速为1.0 mL/min，所述流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液。

2.如权利要求1所述的一种野菊花药材质量评价方法，其特征在于：步骤（1）和步骤（2）中所述的溶剂为甲醇溶液，步骤（2）中所述的回流为水浴回流。