[发明专利]一种脑脱细胞支架的制备方法

说明书

本发明提供一种脑脱细胞支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用去污剂浸泡漂洗法获得脑脱细胞支架作为细胞载体；(2)对步骤(1)脑脱细胞支架的预血管化，得到预血管化的脑脱细胞支架；(3)将PC12细胞移植到步骤(2)所制备的预血管化的支架中，验证预血管化的脑脱细胞支架中血管网络的形成，在组织工程中对种子细胞移植的重要性。本发明为脑脱细胞支架作为细胞载体用于中枢神经系统损伤的修复提供了实验依据，同时初步构建的脑脱细胞支架预血管化的方法为脑脱细胞支架预血管化后携带种子细胞移植在创伤性脑损伤后组织、神经再生修复提供了新的治疗策略。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种脑脱细胞支架的制备方法。

背景技术

创伤性颅脑损伤(tramatic brain injury，TBI)作为临床上最常见的中枢神经系统(central nervous system，CNS)疾病，致死率和致残率极高，总体预后差，给社会和家庭造成了沉重的负担。经研究发现TBI后继发性神经损伤主要是以神经细胞凋亡、丢失为主，且神经元不具备再生能力，损伤后自身无法获得再生^]，因此，细胞替代治疗对于TBI后的神经再生修复具有重要的意义，这也一直是国内外TBI治疗的研究热点。然而由于移植微环境的限制和血脑屏障的存在，传统的通过输注的方式将种子细胞移植到脑损伤区的效率并不理想。同时，TBI后脑损伤局部可形成缺损空洞或软化灶，并以胶质疤痕修复为主，进一步阻碍了神经元的再生修复，因此如何使移植的种子细胞更为有效进入脑损伤区、并且存活发挥功能是当前脑损伤后神经再生修复研究所面临的重大难题。目前较多的研究发现TBI后利用壳聚糖、多肽水凝胶、丝素蛋白等生物材料构建可携带干细胞的复合支架可明显改善大鼠的神经功能恢复。构建与脑损伤区形态匹配的细胞载体支架，可有效输送种子细胞，为种子细胞的生长提供适宜的空间，并减少胶质增生。然而无论哪一种人工合成的用于神经修复的生物材料都不能代表真正的脑组织，它无法完全“拷贝”出中枢神经系统微环境，不能完全提供正常生理状态下神经组织对各种神经细胞的支持作用。而当前以“全器官脱细胞及再细胞化方案”为基础的人工生物器官作为组织工程研究的一部分，已经成为再生医学研究的热点，有着巨大的临床应用前景。相对于传统的人工生物材料，来源于脱细胞基质的支架是一种良好的天然的组织工程材料：它利用不同的方法除去组织或器官内的细胞成分和可溶性蛋白，仅保留组织结构中的不溶性基质成分，主要为细胞外基质(Extrancecellμlar matrixc，ECM)，其无免疫源性或免疫源性极低。同时，EMC具有“生理状态下呈三维空间结构，可为携带种子细胞、或为新组织的生成提供网状结构性支架；其包含有胶原、粘多糖、生长因子等可支持种子细胞粘附，存活和增殖，在组织修复和重构中起着重要的促进作用。”目前已有研究将器官特异性的种子细胞选择性灌注到靶器官的ECM支架中，在体外成功的合成有功能的生物人工心脏、肝脏、肺脏、小肠等器官。

近期有文献报道，单纯移植脑脱细胞后细胞外基质可以明显改善颅脑外伤后神经功能的恢复；移植携带有bFGF的脑脱细胞支架可以明显增强帕金森大鼠的神经保护作用。同时，小脑组织经漂洗法获得的脱细胞支架可种植神经干细胞，并诱导神经干细胞向星形胶质细胞、神经元等分化。但由于CNS特殊、复杂的解剖结构及生理功能，目前缺乏理想、可适于临床运用的大脑脱细胞支架，有关脑脱细胞支架的研究仍处于早期尝试阶段，尚无公认的脱细胞方法，因此，寻找一个制备脑组织脱细胞支架的最佳方案具有极高的研究价值。

发明内容

本发明提供一种脑脱细胞支架的制备方法，以解决背景技术中所提出的问题。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种脑脱细胞支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用去污剂浸泡漂洗法获得脑脱细胞支架作为细胞载体；(2)对步骤(1)脑脱细胞支架的预血管化，得到预血管化的脑脱细胞支架。