[发明专利]一种金枪鱼鱼肉ACE抑制肽咀嚼片的制备方法

权利要求书

1.一种金枪鱼鱼肉ACE抑制肽咀嚼片的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：

1）使用酶解法从金枪鱼鱼肉中提取得到ACE抑制肽；所述ACE抑制肽的肽段氨基酸序列为Ser-Pro、Val-Asp-Arg-Tyr-Phe、Met-Trp-Asn、Met-Glu-Lys-Ser、Met-Lys-Lys-Ser或Leu-Pro-Arg-Ser；

金枪鱼肉 ACE 抑制肽的制备方法，包括以下步骤：

a）将金枪鱼白肉解冻、烘干除去水份，随后在金枪鱼中加入乙酸乙酯，浸没脱脂，旋转蒸发

后，烘干、粉碎备用；

b）将预处理后的白肉粉末加入蒸馏水，调节 pH 值至 8.5-10.5 后，加入 1-3wt%碱性蛋白酶，在45-65℃下酶解3h，得到酶解液；

c） 将酶解液在 100℃水浴下加热 10min 进行灭酶处理，随后在 4000r 下离心20min，取上清液，得灭酶酶解液，随后冷冻干燥，得到多肽粉，测 ACE 抑制活性；

d）使用 3.5 KDa 的超滤膜对金枪鱼白肉酶解液进行超滤分级，将产物组分冷冻干燥后得到酶解物粉；随后将酶解物粉与超纯水配成浓度为 50 mg/mL 的溶液，并于 4 ℃下以12000 r/min离心 10 min，去除不溶性杂质， 用已活化葡聚糖凝胶 Sephadex G-25 过滤层析，冷冻干燥后，配成浓度为 100 mg/mL 的溶液，经 0.45μ m 微孔滤膜过滤，以乙腈-水-三氟乙酸(TFA)为洗脱液进行梯度洗脱，流速为 2ml/min，经高效液相色谱柱 ZorbaxSB-C18 纯化分析，氨基酸测序、合成得到金枪鱼白肉 ACE 抑制肽；

或者，金枪鱼肉 ACE 抑制肽的制备方法，包括以下步骤：

a）将金枪鱼红肉解冻、烘干除去水份，随后在金枪鱼中加入乙酸乙酯，浸没脱脂，旋转蒸发

后，烘干、粉碎备用；

b）将预处理后的红肉粉末加入蒸馏水，调节 pH 值至 6-8 后，加入 1-3wt%碱性蛋白酶，在45-65℃下酶解 4h，得到酶解液；

c）将酶解液在 100℃水浴下加热 10min 进行灭酶处理，随后在 4000r 下离心20min，取上清液，得灭酶酶解液，随后冷冻干燥，得到多肽粉，测 ACE 抑制活性；

d）使用 3.5 KDa 的超滤膜对金枪鱼红肉酶解液进行超滤分级，将产物组分冷冻干燥后得到酶解物粉；随后将酶解物粉与超纯水配成浓度为 50 mg/mL 的溶液，并于 4 ℃下以12000 r/min离心 10 min，去除不溶性杂质，用已活化葡聚糖凝胶 Sephadex G-25 过滤层析，冷冻干燥后，配成浓度为 100 mg/mL 的溶液，经 0.45μ m 微孔滤膜过滤，以乙腈-水-三氟乙酸(TFA)为洗脱液进行梯度洗脱，流速为 2ml/min，经高效液相色谱柱 Zorbax SB-C18 纯化分析，氨基酸测序、合成得到金枪鱼红肉 ACE 抑制肽；

2）原辅料预处理：将ACE抑制肽、制备辅料以及食品添加剂研磨粉碎过筛；

3）将ACE抑制肽、制备辅料以及食品添加剂混合制备得到软材料；

4）将软材料干燥后进行筛分，制成干燥粒料；

5）将干燥粒料进行压片、杀菌、包装，制得金枪鱼鱼肉ACE抑制肽咀嚼片。

2.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼肉ACE抑制肽咀嚼片的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述辅料各组分的质量份数为：脱脂奶粉5-10份，淀粉25-30份，山梨醇10-15份。

3.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼肉ACE抑制肽咀嚼片的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述食品添加剂各组分的质量份数为：矫味剂40-50份，酸味剂2-5份，所述矫味剂为麦芽糖醇、山梨糖醇、蔗糖、木糖醇中的一种或几种，所述酸味剂为柠檬酸、苹果酸或乳酸中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼肉ACE抑制肽咀嚼片的制备方法，其特征在于，步骤3）中制备软材料时各组分质量份数为：ACE抑制肽10-15份，辅料35-50份，食品添加剂40-50份。