[发明专利]一种双靶点嵌合抗原受体及其表达载体和应用

说明书

本发明公开了一种双靶点嵌合抗原受体及其表达载体和应用，属于肿瘤免疫药物领域。所述双靶点嵌合抗原受体包括：依次连接的信号肽、靶向NKG2DL的受体NKG2D胞外区、靶向GPC3单链抗体、加长CD8α铰链区、跨膜区、共刺激因子和胞内信号域，信号肽的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，靶向NKG2DL的受体NKG2D胞外区的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示，靶向GPC3单链抗体的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：3所示，加长CD8α铰链区的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：4所示，跨膜区的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所示，胞内信号域的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：6所示。该双靶点嵌合抗原受体能够避免低丰富抗原表达肿瘤细胞产生逃逸的问题，从而有效降低肿瘤复发的风险。

技术领域

本发明涉及肿瘤免疫药物领域，特别涉及一种双靶点嵌合抗原受体及其表达载体和应用。

背景技术

原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一，大部分的原发性肝癌为肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)，它在恶性肿瘤的发病率中排名第五，致死率为第三。在我国，肝癌的发病率和死亡率位居癌症中的第二位。

嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor gene-modified T cell，CAR-T)技术是将融合有CAR基因的核酸导入到自体或异体T淋巴细胞基因组中构建而成。CAR-T在血液瘤中的应用中表现出令人可喜的治疗效果，特别对复发、难治的B淋巴细胞白血病病人，缓解达到90％以上。但在实体瘤的应用方面，特别是肝癌方面，由于缺乏肿瘤特异性抗原和实体瘤本身的肿瘤异质性和肿瘤微环境更为复杂，致使其抗肿瘤的效果不佳。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种双靶点嵌合抗原受体及其表达载体和应用。所述技术方案如下：

一方面，本发明提供了一种双靶点嵌合抗原受体，包括：依次连接的信号肽、靶向NKG2DL的受体NKG2D胞外区、靶向GPC3单链抗体、加长CD8α铰链区、跨膜区、共刺激因子和胞内信号域，所述信号肽的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，所述靶向NKG2DL的受体NKG2D胞外区的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示，所述靶向GPC3单链抗体的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：3所示，所述加长CD8α铰链区的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO：4所示，所述跨膜区的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所示，所述胞内信号域的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：6所示。

具体地，所述双靶点嵌合抗原受体还包括连接肽，所述连接肽连接在所述靶向NKG2DL的受体NKG2D胞外区和所述靶向GPC3单链抗体之间。

进一步地，所述连接肽的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：7所示。

具体地，所述共刺激因子包括：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、ICOS、NKG2D和B7-H3中的至少一种。

进一步地，所述共刺激因子为4-1BB，且所述共刺激因子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：8所示。

另一方面，本发明实施例提供了一种表达载体，所述表达载体包括载体和上述双靶点嵌合体抗原受体。

进一步地，所述载体为慢病毒载体。

再一方面，本发明实施例提供了一种上述双靶点嵌合体抗原受体的应用，所述应用包括：将所述双靶点嵌合体抗原受体作为抗肿瘤药物，且所述肿瘤表达靶蛋白NKG2DL和靶蛋白GPC3中的至少一种。

具体地，所述应用包括：将所述双靶点嵌合体抗原受体作为抗肝癌药物。