[发明专利]检测非抑菌固氮菌的方法

说明书

本发明属于微生物技术领域，涉及一种检测非抑菌固氮菌的方法。该方法包括以下步骤：(1)获取土壤样本，将土壤样本接种于Ashby固体培养基中培养；(2)挑取部分或全部单菌落分别进行划线培养，分离获得多个单菌株；(3)挑取多个单菌株中的一个接种于Ashby液体培养基中，进行发酵培养，获得发酵液；(4)获得去除该菌株的发酵液；(5)获得指示菌；(6)将指示菌接种于有氮源的培养基中，并向部分培养基中加入去除菌株的发酵液，进行培养，分别获得有氮源不加该发酵液的培养液和有氮源加该发酵液的培养液；(7)重复步骤(3)‑(6)；(8)对所有的培养液的生物量进行检测，根据生物量判断土壤样品中是否含有非抑菌固氮菌。该方法快速准确。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，更具体地，涉及一种检测非抑菌固氮菌的方法。

背景技术

资源和环境问题是目前人类最关注的问题。化肥的大量使用和有机肥施用不足导致土壤养分比例失调，使得土壤质量下降。微生物肥料因具有肥效高、无毒、不污染环境等特点而成为化肥的有效替代品。微生物肥料所含有的微生物菌剂是其发挥作用的关键，尤其复合菌剂，对农作物生长增产及土壤综合治理起到重要作用。

固氮菌能够将空气中或土壤中的无机氮转化为有机氮，为植物提供营养，因此是一种很好的微生物菌剂，能够增加土壤的肥力。然而，具有抑制其他微生物生长的固氮菌(简称抑菌固氮菌)在固氮同时还产生广谱抗生素的抑制因子，抑制其他微生物生长，该抑菌固氮菌会造成土壤中的微生物单一化，不适合制成复合菌剂。不具有抑制其他微生物生长的固氮菌(简称非抑菌固氮菌)在固氮同时不会抑制其他微生物生长，适合制成复合菌剂。

目前筛选固氮菌的方法通常采用蒸馏-中和滴定法和分光光度法测定发酵产物中氨氮的含量，步骤繁琐，并且不能检测该固氮菌是否具有抑制其他微生物生长的特性。因此，需要一种能够检测固氮菌是抑菌固氮菌，还是非抑菌固氮菌的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测非抑菌固氮菌的方法，能够快速准确地检测出土壤中是否含有非抑菌固氮菌。

为了实现上述目的，本发明提供一种检测非抑菌固氮菌的方法，该方法包括以下步骤：

(1)获取土壤样本，将所述土壤样本接种于Ashby固体培养基中培养；

(2)如果步骤(1)的培养结果是未出现单菌落，则所述土壤样本中不含有固氮菌；如果步骤(1)的培养结果是出现单菌落，则挑取部分或全部所述单菌落分别进行划线培养，分离获得多个单菌株；

(3)挑取所述多个单菌株中的一个单菌株接种于Ashby液体培养基中，进行发酵培养，获得发酵液；

(4)去除所述发酵液中的菌株，获得去除该菌株的发酵液；

(5)将指示菌接种于种子培养基中进行培养，获得所述指示菌；

(6)将所述指示菌接种于有氮源的葡萄糖铵盐培养基中，并向部分有氮源的葡萄糖铵盐培养基中加入步骤(4)获得的所述去除菌株的发酵液，进行培养，分别获得有氮源不加该发酵液的培养液以及有氮源加该发酵液的培养液；

(7)重复步骤(3)-步骤(6)；

(8)对所有的有氮源不加该发酵液的培养液和所有的有氮源加该发酵液的培养液中的所述指示菌的生物量进行检测，根据所述生物量的大小判断所述土壤样品中是否含有非抑菌固氮菌。

如果土壤样品结成块状，则需要先对土壤样品进行研磨粉碎，以便于接种。

具体地，在步骤(8)中，根据所述生物量的大小判断所述土壤样品中是否含有非抑菌固氮菌包括：

如果部分或者所有的有氮源加该发酵液的培养液的OD₆₀₀值大于所有的有氮源不加该发酵液的培养液的OD₆₀₀值，则所述土壤样本中含有非抑菌固氮菌。