[发明专利]一种利用固定化α-葡萄糖苷酶制备黑曲霉低聚糖的方法

权利要求书

1.一种固定化α-葡萄糖苷酶，其特征在于，所述固定化α-葡萄糖苷酶按照如下方法制备：

（1）树脂预处理；

（2）向经过预处理的树脂中加入α-葡萄糖苷酶，进行吸附；

（3）向步骤（2）吸附后的体系，加入戊二醛，进行交联；

（4）将步骤（3）交联后的溶液离心弃上清，用缓冲液反复洗涤，直至洗涤液中检测不到酶活，即得到固定化酶；

所述树脂为阴离子交换树脂Amberlite FPA90 Cl；所述缓冲液为pH为7.0~8.5、浓度为45~55 mmol/L的磷酸盐缓冲液；所述戊二醛以体积比为0.01~0.08%的量加入；

所述树脂的添加量为0.5 g，添加的α-葡萄糖苷酶总酶活为52~156 U；

所述吸附是在20~25℃、200~220 r/min条件下吸附3~6 h；

所述交联是于3~5℃静置交联1~3 h。

2.如权利要求1所述的固定化α-葡萄糖苷酶，其特征在于，所述树脂预处理的步骤包括：用2~3倍树脂体积的90~95%乙醇浸泡20~24 h，弃杂液，洗去杂质和浮色，直至溶液pH为6.5~7.5；以0.8~1.2 mol/L NaOH浸泡树脂4~6 h，洗涤，直至溶液pH为6.5~7.5；再以0.8~1.2 mol/L HCl浸泡树脂4~6 h，洗涤，直至溶液pH为6.5~7.5。

3.权利要求1或2所述的固定化α-葡萄糖苷酶在生产黑曲霉低聚糖中的应用，其特征在于，以固定化α-葡萄糖苷酶为催化剂，以麦芽糖为底物，制备黑曲霉低聚糖。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述麦芽糖的浓度为200~400 g/L，固定化α-葡萄糖苷酶的添加量为5~20 U/g麦芽糖，反应条件为55~75℃条件下反应20~48 h。

5.制备权利要求1所述固定化酶的方法，其特征在于，所述方法为：（1）树脂预处理；

（2）向经过预处理的树脂中加入α-葡萄糖苷酶，进行吸附；

（3）向步骤（2）吸附后的体系，加入戊二醛，进行交联；

（4）将步骤（3）交联后的溶液离心弃上清，用缓冲液反复洗涤，直至洗涤液中检测不到酶活，即得到固定化酶；

所述树脂为阴离子交换树脂Amberlite FPA90 Cl；所述缓冲液为pH为7.0~8.5、浓度为45~55 mmol/L的磷酸盐缓冲液；所述戊二醛以体积比为0.01~0.08%的量加入；

所述树脂的添加量为0.5 g，添加的α-葡萄糖苷酶总酶活为52~156 U；

所述吸附是在20~25℃、200~220 r/min条件下吸附3~6 h；

所述交联是于3~5℃静置交联1~3 h。