[发明专利]一种定量检测单增李斯特菌的方法

权利要求书

1.一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）金属模拟酶的制备及修饰：合成AuNR@Pt纳米颗粒，并在AuNR@Pt纳米颗粒表面分别修饰单增李斯特菌抗体和拉曼信标分子4-MBA；

（2）金磁纳米颗粒的制备及修饰：合成Fe₃O₄@Au纳米颗粒，并在Fe₃O₄@Au表面修饰单增李斯特菌抗体；

（3）制备检测线包被单增李斯特菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体、结合垫上含有修饰4-MBA的AuNR@Pt和金磁纳米颗粒Fe₃O₄@Au的试纸条；

（4）在试纸条检测区域下方放置磁铁；

（5）采用颜色法和SERS法测定样品中的单增李斯特菌含量。

2.根据权利要求1所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，所述的磁铁的磁场强度为20mT-200mT。

3.根据权利要求1所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，所述的试纸条包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、磁性纳米颗粒和模拟酶标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上，所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线；所述检测线包被单增李斯特菌抗体；所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体；所述纳米颗粒标记物结合垫有修饰4-MBA的AuNR@Pt和金磁纳米颗粒Fe₃O₄@Au。

4.根据权利要求3所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，试纸条的制备方法包括以下步骤：

（1）金属模拟酶的制备及修饰：合成金纳米棒AuNR纳米颗粒，在其表面包被一层铂，得到AuNR@Pt纳米颗粒；在AuNR@Pt纳米颗粒表面分别修饰单增李斯特菌抗体和拉曼信标分子4-MBA；

（2）金磁纳米颗粒的制备及修饰：合成磁性纳米颗粒Fe₃O₄，在其表面包被一层金，得到Fe₃O₄@Au纳米颗粒；在Fe₃O₄@Au表面修饰单增李斯特菌抗体；

（3）结合垫的处理：将合成的AuNR@Pt纳米颗粒溶液和Fe₃O₄@Au纳米颗粒溶液喷于结合垫上，得到处理后的标记物结合垫；

（4）硝基纤维膜的处理：将单增李斯特菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线，将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线，烘干，即得到处理后的硝基纤维膜；

（5）试纸条的组装：在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜，再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸，组装后裁剪为60mm长，3.8mm宽的试纸条，即得到所述定量检测单增李斯特菌的免疫层析试纸条，将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。

5.根据权利要3所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，单增李斯特菌抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。

6.根据权利要求1所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，步骤（3）的具体步骤为：样品溶液在试纸条上层析，结束后，在检测区域加入3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢溶液，反应5分钟后，拍下检测区域的图像，基于图像定量测定样品中的单增李斯特菌含量；同时采用配备785nm激光的拉曼光谱仪采集检测线和质控线的SERS光谱，基于SERS光谱定量测定样品中的单增李斯特菌含量。

7.根据权利要求1所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，金磁纳米颗粒Fe₃O₄@Au直径为100-500nm。