[发明专利]一种百菌清单域抗体库和百菌清单域抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种百菌清单域抗体库和百菌清单域抗体及其应用，属于基因工程和免疫工程技术领域。本发明分别合成免疫原CTN‑NH₂‑KLH和包被原CTN‑OH‑OVA，免疫小鼠后测定效价，选取效价高的小鼠，取其脾脏提取RNA，利用噬菌体展示技术，以大肠杆菌TG1为宿主菌，构建百菌清单域抗体库。本发明利用噬菌体筛选技术对该抗体库进行筛选，获得对百菌清具有高亲和力的抗体，并且节约了抗体制备的成本，容易制备大量抗体，还方便了以后对已获得抗体的改造，应用前景十分广泛。

技术领域

本发明涉及基因工程和免疫工程技术领域，更具体的说是涉及一种百菌清单域抗体库和百菌清单域抗体及其应用。

背景技术

抗体是免疫分析的重要组成部分，能够特异性结合抗原。完整的抗体有两条重链和两条轻链构成，重轻链的可变区对抗原的结合起到了关键的作用。除了完整的抗体，抗体的片段如Fab、scFv、DAB，也可用于免疫检测。抗体制备技术的发展经历了三个阶段：多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体。

百菌清(CTN)是一种有机氯杀菌剂，对各种农作物的真菌病害具有防治作用。由于其广泛使用，土壤、农产品、水等中存在着残留污染的现象，因此需要对农产品及环境中百菌清的残留进行监测。农药小分子常用的检测方法可以分为两类，一类是采用精密仪器检测，该方法能满足灵敏度和准确度的要求，但是，样品前处理步骤复杂，对设备要求较高，检测成本高，无法实现对大量样品的快速高通量检测；另一类是免疫分析方法，免疫分析方法可以弥补上述不足之处，实现快速、经济、高通量的检测。但是，目前关于百菌清单域抗体库的构建研究尚属空白；因此，提供一种百菌清单域抗体库和百菌清单域抗体及其应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种百菌清单域抗体库的构建方法及其应用，为百菌清的免疫检测提供一种百菌清单域抗体库，通过对抗体库的筛选，可以快速获得能够用于百菌清检测的抗体。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明分别合成免疫原CTN-NH₂-KLH和包被原CTN-OH-OVA，免疫小鼠后测定效价，选取效价高的小鼠，提取其脾脏RNA，逆转录成cDNA。利用重链通用引物扩增VH基因片段，将其与载体连接，通过电转化转化进入大肠杆菌TG1中，构建百菌清单域抗体库。

高亲和力单域抗体的筛选：采用负筛选和竞争洗脱相结合的方法获得，用连接臂及偶联蛋白不同于免疫原的包被原CTN-OH-OVA包被6孔板作为阳性孔，未包被的孔作为阴性孔，MPBS封闭，首先将噬菌体库加入阴性孔中，孵育后吸出加入阳性孔中继续孵育，结合的噬菌体用百菌清进行竞争洗脱，经3轮筛选即可获得高亲和性单域抗体。

单域抗体的可溶性表达：提取质粒，酶切后与pET26b质粒进行连接，转化宿主大肠杆菌BL21，利用IPTG进行诱导表达，经镍柱纯化即可获得可溶性的单域抗体。

本发明利用包被原进行多轮筛选，可以获得对百菌清具有高亲和力的单域抗体，进而用于百菌清的检测。本发明在获得抗体的同时也获得了抗体的基因型，方便后期对抗体的改造等工作。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种百菌清单域抗体库和百菌清单域抗体及其应用，分别合成免疫原CTN-NH₂-KLH和包被原CTN-OH-OVA，免疫小鼠后测定效价，选取效价高的小鼠，取其脾脏提取RNA，利用噬菌体展示技术，以大肠杆菌TG1为宿主菌，构建百菌清单域抗体库。本发明利用噬菌体筛选技术对该抗体库进行筛选，获得对百菌清具有高亲和力的抗体，并且节约了抗体制备的成本，容易制备大量抗体，还方便了以后对已获得抗体的改造，应用前景十分广泛。

附图说明