[发明专利]百菌清抗独特型单域抗体库和抗独特型单域抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种百菌清抗独特型单域抗体库和抗独特型单域抗体及其应用，属于基因工程和免疫工程技术领域。本发明由百菌清单域抗体库筛选获得百菌清单域抗体后，再次免疫小鼠，取其脾脏提取RNA，利用噬菌体展示技术，以大肠杆菌TG1为宿主菌，构建百菌清抗独特型单域抗体库。本发明利用噬菌体筛选技术对该抗体库进行筛选，获得与百菌清具有竞争结合活性的抗独特型单域抗体，并且节约了抗体制备的成本，容易制备大量抗体，还方便了以后对已获得抗体的改造；为百菌清的检测提供了绿色免疫检测方法，减少检测方法对操作人员的危害，减少了有机物质的使用，具有十分广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及基因工程和免疫工程技术领域，更具体的说是涉及一种百菌清抗独特型单域抗体库和抗独特型单域抗体及其应用。

背景技术

百菌清是一种取代苯类杀菌剂，化学名称2,4,5,6-四氯-1,3-苯二甲腈，分子式C₈Cl₄N₂。百菌清的作用机制主要是破坏真菌细胞的三磷酸甘油醛脱氢酶活性，使其正常的新陈代谢受到破坏，被广泛的应用于蔬果、谷物及经济作物上的真菌病害防治。百菌清具有一定的急性和慢性毒性，在环境中较稳定，具有明显的蓄积毒性。由于百菌清的广泛使用，其残留问题也引起了广泛的关注。

农药小分子的检测除了采用精密仪器检测，还可以采用免疫分析方法，精密仪器检测灵敏度和准确度都很高，但是，样品前处理复杂，对设备要求高，检测成本高，对大量样品进行检测时优势不明显；免疫分析方法正好可以弥补精密仪器检测的不足之处，实现对样品快速、经济、高通量的检测。抗体是免疫分析的重要组成部分，完整的抗体有两条重链和两条轻链构成，重轻链的可变区对抗原的结合起到了关键的作用。除了完整的抗体，抗体的片段如Fab、scFv、DAB，也可用于免疫检测。

抗体决定簇有三种：同种型、同种异型和独特型。同种型决定了抗体型与亚型；同种异型决定了种间抗体的多样性；独特型决定了与不同抗原的结合特异性。1963年Oudin等发现了一种既不同于同种型，也不同于同种异型的抗原决定簇，将其称为idiotype，意为个体基因型，现译为独特型。1974年丹麦学者Jerne提出了免疫网络学说，机体受到外来抗原刺激，淋巴细胞被激活，产生抗体Ab1，随之识别Ab1的淋巴细胞被激活，产生抗独特型抗体Ab2，还可以有Ab3、Ab4等抗体产生，在体内构成了复杂的Id与anti-Id网络。能够识别Ab1独特型决定簇的Ab2即为抗原的抗独特型抗体。抗独特型抗体在免疫分析方法中可以被用作抗原或标准物的替代品，建立绿色免疫分析方法，为抗原合成提供了新途径。抗独特型抗体类型有三种：多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体。噬菌体展示技术是目前比较成熟、应用相对广泛的基因抗体技术。20世纪80年代，噬菌体展示技术逐步建立并发展起来，该系统可以将抗体基因表达在重组噬菌体衣壳蛋白的表面，通过多轮亲和筛选，分离获得目的抗体。

噬菌体展示技术的优势主要体现在基因型与表型的统一，噬菌体展示技术以噬菌体或噬菌粒为载体，将外源多肽或蛋白质基因整合到噬菌体基因组中，外源基因以融合形式表达并展示在噬菌体的表面，实现了对蛋白(表型)和基因型的同步筛选。但是，目前关于百菌清抗独特型抗体库的构建研究尚属空白；因此，提供一种百菌清抗独特型单域抗体库和抗独特型单域抗体及其应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种百菌清抗独特型单域抗体库和抗独特型单域抗体及其应用，为百菌清的免疫检测提供一种百菌清抗独特型单域抗体库，利用筛选获得的抗独特型单域抗体建立百菌清的绿色免疫检测方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明中百菌清单域抗体是以百菌清-NH₂-KLH作为免疫原免疫小鼠，构建鼠源重链抗体库，以百菌清-OH-OVA作为包被原筛选获得。