[发明专利]一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及多肽化学和免疫学领域技术领域，具体是公开了一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒，所述试剂盒通过双抗体夹心法检测所述人GR的含量，所述试剂盒包括包被板、校准品、结合抗体、酶结合物、质控品、显色剂A、显色剂B、终止液和浓缩洗涤液；所述包被板包被有GR包被抗体，所述GR包被抗体来源于GR抗原，所述GR抗原是通过使所述人GR抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的，所述结合抗体是由GR抗原制备而成的。本发明克服了现有技术的不足，该试剂盒操作简便、快速，并且检测准确度和精密度好、特异性高、灵敏度好、稳定性好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。

技术领域

本发明涉及多肽化学和免疫学领域技术领域，具体属于一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒。

背景技术

谷胱甘肽还原酶(GR)是一种黄素酶，每分子酶蛋白含有一分子的FAD，广泛存在于人体红细胞、单核巨噬细胞、心、肝、肾等组织细胞中，定位于微粒体及细胞液部分。是维持细胞中还原型谷胱甘肽(GSH)含量的主要黄素酶，它可及时地清除人体代谢过程中产生的氧自由基(OFR)，通过酶学过程或直接化学反应解毒OFR，防止它们对血红蛋白膜蛋白和众多酶蛋白上的巯基进行氧化,维持细胞的正常功能及寿命。GR由辅酶NADPH供氢，催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)，还原成还原型谷胱甘肽(GSH)。

谷胱甘肽(glutathione)是一种由谷氨酸，半胱氨酸和甘氨酸组成的多肽，分子中半胱氨酸的-SH是主要的功能性基团。谷胱甘肽存在于所有动物细胞中，在正常情况下，以其硫醇还原性存在，是细胞内主要的非蛋白质巯基化合物，在许多生命活动中，起着直接或间接的作用包括基因表达调控、酶活性和代谢调节、对细胞的保护、氨基酸转运、免疫功能调节等。氧化应激或亲电化合物攻击可使细胞内的GSH含量降低，或使其转变为双硫氧化型(GSSG)。谷胱甘肽除具有抗氧化和调节机体巯基平衡的作用外，在中枢神经系统中也有神经递质或神经调质样作用。GSH不是一种典型的三肽，其结构中含有非α-肽键，由谷氨酸的γ-COOH与半胱氨酸的α-NH2脱水形成。GSH是一种抗氧化剂，可保护蛋白质分子中的-SH免遭氧化，保护巯基蛋白和酶的活性。在谷胱甘肽过氧化酶的作用下，GSH可以还原细胞内产生的H2O2，生成H2O，同时，GSH被氧化为GSSG，后者在谷胱甘肽还原酶的催化下，又生成GSH。GSH是机体主要的抗氧化剂之一，主要作用有：维护红细胞内含巯基的膜蛋白和酶蛋白的完整性及其正常代谢功能：它与谷胱甘肽过氧化酶共同作用，使双氧水还原成水。通过上述作用维持红细胞膜的完整性和保护红细胞免受氧化剂的损害。GSH水平的高低主要取决于糖代谢中的己糖磷酸旁路的红细胞酶(G6PD)及GSH生物合成酶。GSH合成酶缺乏可导致GSH水平极度低下，而缺乏G6PD时，红细胞NADPH生成减少，致使GSSG还原为GSH减少，导致红细胞GSH含量降低及GSSG含量升高。

目前国内测定谷胱甘肽还原酶的方法主要有液体双试剂法和紫外酶法。液体双试剂目前存在稳定性差，抗干扰能力差等缺点；紫外酶法谷胱甘肽还原酶的试剂盒主要为进口干粉试剂，虽然结果准确，但是价格不菲，使用前需要复溶，操作不方便。复溶后需要尽快使用，使用非常不方便并且复溶后使用不完会出现大量的浪费。

发明内容

本发明的目的是提供了一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒及其检测方法，克服了现有技术的不足，该试剂盒操作简便、快速，并且检测准确度和精密度好、特异性高、灵敏度好、稳定性好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。

为解决上述问题，本发明所采取的技术方案如下：

一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒，所述试剂盒通过双抗体夹心法检测所述人GR的含量，所述试剂盒包括包被板、校准品、结合抗体、酶结合物、质控品、显色剂A、显色剂B、终止液和浓缩洗涤液；