[发明专利]一种检测NAT2基因多态性的引物探针及其试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测NAT2基因多态性的引物探针及其试剂盒，所述探针包括NAT2基因7个SNP位点扩增引物和MGB探针；本发明采用了等位基因特异PCR(ARMS‑PCR)和MGB探针相结合的方法，针对结核病患者NAT2基因多态性进行检测，进行基因分型，分析和评估其在抗结核病药物治疗过程中出现的肝损伤情况，检测结果判断准确，适合试剂盒的开发。

技术领域

本发明属生物技术和生物检测领域，特别涉及检测NAT2基因多态性的引物探针及其试剂盒。

技术背景

结核病(TB)是由结核分枝杆菌引起的以肺部病变为主的慢性传染性疾病。虽然结核病的发病曾经得到一定的控制，但目前结核病仍是单因致死率最高的传染病。

目前抗结核药物治疗仍然是控制结核病传播的最有效方法。直接面视下督导化疗(DOTS) 是目前结核病控制的有效策略，它主要应用4个一线抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)和吡嗪酰胺(PZA)联合治疗6个月或更长时间。然而，其中三个关键性的一线抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)和吡嗪酰胺(PZA)均有潜在的肝毒性，尤其是长期服用抗结核药物带来的毒副作用较大。约1.00％～30.18％的患者因为严重的肝损伤而不得不更换药物或终止治疗，少数患者甚至发生肝衰竭。且药物之间存在相互影响，联合用药时肝毒性的发生率和严重程度明显增加，可以导致抗结核药物性肝损伤(Anti-Tubercu1osis Drug Induced Live Injury,ATDILI)，严重者可导致急性坏死性肝炎危及患者的生命。抗结核药物对肝脏的损伤作用主要是由NAT2药物代谢酶对抗结核药物的代谢速率决定的。野生型NAT2代谢酶能较快地将抗结核药物代谢分解，排出体外。而慢代谢型NAT2代谢酶对抗结核药物的代谢作用较慢，药物长时间滞留在肝脏，导致持久的肝损伤2。长期服药可导致急性坏死性肝炎，甚至危及生命。

ATDILI(抗结核药物诱发肝损伤)的发生率从2.5％至34.9％不等，目前ATDILI已成为目前临床上关注的热点。在抗结核治疗同时接受肝保护剂的患者肝损伤发生率(10.0％)显著低于未接受肝保护剂的患者(13.8％,P<0.05)。如能在抗结核药物治疗前进行肝毒性风险预测，对于肝毒性风险高的患者，仔细制定化疗方案，定期(1～2周)复查肝功能、服用肝保护剂，对预防肝损伤的发生是非常有益的。然而，服用肝保护剂费用比较昂贵，会给患者家庭带了额外的经济负担，同时也会有过度用药和浪费资源等问题。本发明能在肺结核患者药物治疗之前就能够利用快速，经济的检测手段预测可能的肝损伤，进而实现精准用药，将不仅为患者家庭节省了一笔不小的开支，也为整个社会节约了医疗成本。

根据上述流行病学资料可见，我国在肺结核病诊断治疗领域规模较大。按照之前估计的 ATDILI发生率计算，其潜在影响人群最多可以达到30万人之多。国内已有少数开展结核病肝损伤相关NAT2基因多态性检测，但其使用的方法以熔解曲线法居多，检测精度低，不能准确分型，容易出现假阳性。

发明内容

针对上述技术问题，发明人提供了一种检测NAT2基因多态性的引物探针，所述引物探针包括扩增引物和MGB探针，所述扩增引物针对7个NAT2的SNP位点。

所述7个SNP的7组引物针对等位基因及其突变位点分别为：rs1801279,akaG191A； rs1041983,aka C282T；rs1801280,aka T341C；rs1799929,aka C481T；rs1799930,aka G590A； rs1208,aka A803G；和rs1799931,aka G857A。

(1)扩增NAT2基因7个SNP位点的ARMS-PCR引物，其碱基序列3’-5’为：