[发明专利]一种鸡传染性支气管炎HI抗原及其制备方法

说明书

本发明提供了一种鸡传染性支气管炎HI抗原及其制备方法，该抗原的制备方法包括病毒的培养、灭活、浓缩、酶处理和冻干等，该方法制备的HI抗原血凝价高，特异性好，灵敏度高，保存时间长，可以在室温条件下进行反应，可用于IBV的诊断、疫苗的效力评价和IBV的分型，便于工业化生产。

技术领域

本发明属于生物制品技术领域,尤其涉及一种鸡传染性支气管炎HI抗原及其制备方法。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的一种急性、高度接触性的呼吸道传染病，该病毒可感染所有日龄的鸡，肉鸡感染后，肉质品质下降，蛋鸡感染后，产蛋数量与质量都会下降。

现阶段，IBV病毒的防治主要是通过疫苗免疫，但IBV血清型众多，全世界报道的已有30多种，而且随着IBV的持续变异，新的血清型也不断涌现，在中国IBV流行毒株随不同时间和地区呈现较大差异，由于IBV毒株的不同血清型间存在不产生交叉保护或者交叉保护效果较弱的特点，使得疫苗的免疫不断收到挑战。

此外，目前对IB疫苗的效力检验主要是通过HI试验的方式进行，所制备的HI抗原的反应条件一般为：2～8℃作用40～60min，但该反应条件对于工业化生产和常规检测有一定的困难。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种鸡传染性支气管炎HI抗原及其制备方法。以解决现有技术中，HI抗原的反应条件受限的问题。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

1、一种鸡传染性支气管炎HI抗原，其特征在于，该抗原的反应温度为室温(18～26℃)和低温(2～8℃)；

2、一种鸡传染性支气管炎HI抗原的制备方法，包括以下步骤：

1)将鸡传染性支气管炎病毒稀释至10²EID₅₀～10⁴EID₅₀，经尿囊腔接种10～11日龄鸡胚，弃去30h内非特异性死亡鸡胚，收集30～40h存活的鸡胚，并在2～8℃放置4～24h，然后收获病毒液；

2)将步骤1)中收获的病毒液以5000～8000r/min离心30～60min，取上清，加入适量甲醛溶液灭活；

3)将步骤2)中灭活后的病毒液以5000～8000r/min离心10～30min，取上清，然后浓缩20～100倍；

4)在步骤3)浓缩后的病毒液中加入I型磷酸酯酶C并混合，至磷酸酯酶的终浓度为1～2.5units/mL，然后在37℃条件下反应2～2.5h，再在2～8℃下放置24h～48h，即得HI抗原；

5)将步骤4)制备的HI抗原与冻干保护剂混合，然后经真空冷冻干燥，制备成冻干型HI抗原。

进一步的，步骤1)鸡传染性支气管炎病毒为Mass型IBV，QX型IBV，4/91型IBV或LDT/3型IBV。

进一步的，步骤2)所述的甲醛溶液在使用前需用HEPES缓冲液稀释，至终浓度为10％。

进一步的，步骤2)所述的甲醛灭活方法为：加入的甲醛溶液终浓度为0.1％，然后经2-8℃灭活16～18h；或加入的甲醛溶液终浓度为0.2％，然后经2～8℃灭活14～16h；

进一步的，步骤3)所述的浓缩方法为利用100KD膜包或中空纤维浓缩20～100倍。

进一步的，步骤4)所述的I型磷酸酯酶C在使用前，先用HEPES溶液溶解。

进一步的，步骤5)所述的冻干保护剂含有2～5％蔗糖、5～10％脱脂乳和5～10％壳聚糖。