[发明专利]一种鸡传染性支气管炎HI抗原及其制备方法

权利要求书

1.一种鸡传染性支气管炎HI抗原，其特征在于，该抗原的反应温度为室温(18～26℃)和低温(2～8℃)。

2.一种鸡传染性支气管炎HI抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将鸡传染性支气管炎病毒稀释至10²EID₅₀～10⁴EID₅₀，经尿囊腔接种10～11日龄鸡胚，弃去30h内非特异性死亡鸡胚，收集30～40h存活的鸡胚，并在2～8℃放置4～24h，然后收获病毒液；

2)将步骤1)中收获的病毒液以5000～8000r/min离心30～60min，取上清，加入适量甲醛溶液灭活；

3)将步骤2)中灭活后的病毒液以5000～8000r/min离心10～30min，取上清，然后浓缩20～100倍；

4)在步骤3)浓缩后的病毒液中加入I型磷酸酯酶C并混合，至磷酸酯酶的终浓度为1～2.5units/mL，然后在37℃条件下反应2～2.5h，再在2～8℃下放置24h～48h，即得HI抗原；

5)将步骤4)制备的HI抗原与冻干保护剂混合，然后经真空冷冻干燥，制备成冻干型HI抗原。

3.根据权利要求2所述的一种鸡传染性支气管炎HI抗原的制备方法，其特征在于，步骤1)鸡传染性支气管炎病毒为Mass型IBV，QX型IBV，4/91型IBV或LDT/3型IBV。

4.根据权利要求2所述的一种鸡传染性支气管炎HI抗原的制备方法，其特征在于步骤2)所述的甲醛溶液在使用前需用HEPES缓冲液稀释，至终浓度为10％。

5.根据权利要求2所述的一种鸡传染性支气管炎HI抗原的制备方法，其特征在于步骤2)所述的甲醛灭活方法为：加入的甲醛溶液终浓度为0.1％，然后经2-8℃灭活16～18h；或加入的甲醛溶液终浓度为0.2％，然后经2～8℃灭活14～16h。

6.根据权利要求2所述的一种鸡传染性支气管炎HI抗原的制备方法，其特征在于步骤3)所述的浓缩方法为利用100KD膜包或中空纤维浓缩20～100倍。

7.根据权利要求2所述的一种鸡传染性支气管炎HI抗原的制备方法，其特征在于步骤4)所述的I型磷酸酯酶C在使用前，先用HEPES溶液溶解。

8.根据权利要求2所述的一种鸡传染性支气管炎HI抗原的制备方法，其特征在于步骤5)所述的冻干保护剂含有2～5％蔗糖、5～10％脱脂乳和5～10％壳聚糖。

9.根据权利要求2所述的一种鸡传染性支气管炎HI抗原的制备方法，其特征在于步骤5)所述的抗原与冻干保护剂的混合比例为1:1。