[发明专利]一种基于固态纳米孔结肠癌kras基因突变检测方法在审
| 申请号： | 201910685231.3 | 申请日： | 2019-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN110408677A | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 谭生伟 | 申请（专利权）人： | 苏州丽纳芯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6809 | 分类号： | C12Q1/6809 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 215300 江苏省苏州市昆山开发*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 纳米孔 突变型基因 固态纳米 流体装置 酶切位点 突变检测 点突变 结肠癌 密码子 垫片 突变 组装 测量 芯片 测量离子电流 电压反馈控制 电输出信号 目标碱基 小腔室 野生型 吹干 小腔 修饰 清洗 室内 检测 | ||
1.一种基于固态纳米孔结肠癌kras基因突变检测方法,其特征在于：包括以下步骤：
A、将流体装置以及垫片进行清洗，吹干待用；
B、将前后的纳米孔分别和垫片，流体装置组装在一起；
C、组装完之后的纳米孔芯片分别组成了小腔室；
D、将1M/1M KCl溶液注入到纳米孔芯片的两个小腔室内；
E、测量修饰纳米孔前后的电流和电压；
F、在cis面的溶液中加入目标碱基的K-ras癌基因片段。
2.根据权利要求1所述的一种基于固态纳米孔结肠癌kras基因突变检测方法,其特征在于：所述根据步骤A将流体装置以及垫片放入带有蒸馏水的烧杯中，超声清洗20分钟，然后取出流体装置和垫片用洗瓶清洗3-4次，之后氮气吹干待用。
3.根据权利要求1所述的一种基于固态纳米孔结肠癌kras基因突变检测方法,其特征在于：所述根据步骤B将前后的纳米孔分别和垫片，流体装置组装在一起，在组装时，取少量的甲醇溶液置于纳米孔芯片的孔口边缘，降低表面张力浸湿纳米孔。
4.根据权利要求1所述的一种基于固态纳米孔结肠癌kras基因突变检测方法,其特征在于：所述根据步骤C组装完之后的纳米孔芯片分别组成了两个小腔室。
5.根据权利要求1所述的一种基于固态纳米孔结肠癌kras基因突变检测方法,其特征在于：所述根据步骤D使用微量注射器将1M/1M KCl溶液注入到纳米孔芯片的两个小腔室内，让溶液充满整个腔室。
6.根据权利要求1所述的一种基于固态纳米孔结肠癌kras基因突变检测方法,其特征在于：所述根据步骤E将一对AgCl电极一端分别放入两个腔室内，另一端分别连接到膜片钳放大器上，测量修饰纳米孔前后的电流和电压曲线，采样频率为100kHz，low-pass-8-pole滤波，整个测量过程都放入法拉第笼内屏蔽噪声。
7.根据权利要求1所述的一种基于固态纳米孔结肠癌kras基因突变检测方法,其特征在于：所述根据步骤F在cis面的溶液中加入目标107个碱基的K-ras癌基因片段；
目碱基连接探针5’-TTTTTTTTTTTTGTCATTATGTGCTGCCATATCTACTTCAGA-3序列)；
寡核苷酸探针分子完全互补序列(CGTAGGTACTCCTTAAAGTTAGTATTTTTATATGTAGTTTCTGAAGTAGAT ATGGCAGCACATAATGACATATTTGTACTGCGTGTAGTATCAACAACAGTAACAAA)；
非互补序列(ACATGTCTTATATATTCTTTAAAATTTTCATTTTTATATGTACTGTCACTAGTTACTTGTGTGCATAAAGTCATATTAGTACTGCGAGTGGTATCTACCACAGTAACAAA)；
a、在野生型基因在密码子12处存在一个MvaI酶切位点，用MvaI酶切，Ru(bpy)32+标记端与生物素标记端被切开；
b、测量突变的K-ras基因和野生型的K-ras基因离子电流的变化。
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