[发明专利]一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒

说明书

本发明属于生物学免疫层析检测方法领域，具体涉及一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒及其制备方法。该试剂盒由样品垫、结合垫、反应垫、吸水垫和PVC底板组成；所述的反应垫上有包被有抗CA125抗体A2的检测线T1、包被有抗HE4抗体B2的检测线T2以及包被有羊抗鼠IgG的质控线C；通过观察检测线的显色反应即可实现早期卵巢癌的床旁快速筛查诊断。本发明制备的纳米硒免疫层析试剂盒具有特异性强、灵敏度高、准确性好、简便快速、所需检测样本量少、适用于卵巢癌高危人群筛查及家庭自检和床旁快速检测。

技术领域

本发明属于生物学免疫层析检测方法领域，具体涉及一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒及其制备方法。

背景技术

卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，死亡率高居妇科恶性肿瘤之首，同时具有发病率高、病情发展较快、预后不佳、极易复发等特点。早期卵巢癌患者的5年生存率可达70％，但是晚期卵巢癌患者的5年生存率仅有30％。由于卵巢癌的发病隐蔽，早期症状不明显，临床上大多数患者确诊时已为晚期，错过最佳治疗时机。而导致这些情况发生的原因与缺乏简便有效的早期检测方法密切相关。目前临床上对卵巢癌的诊断主要通过实验室检查、妇科检查及影像学检查等方法，这些方法操作复杂、耗时较长，并且需要大型仪器设备辅助。与之相比，血清学肿瘤标志检测具有敏感快速、创伤性小、检测简单、成本较低、易于采集等优点，是目前临床应用最广泛的筛查肿瘤的方法之一，也可用于肿瘤患者的疗效监测、预后评估以及高危人群的筛查。

糖链抗原CA125是一种糖蛋白复合物，主要存在于卵巢组织中。正常人血液中CA125含量较低，而在上皮性卵巢癌患者中CA125高度表达，并且可以在患者血液中被检测到(Zwakman N,Journal of gynecologic oncology)。作为当前卵巢癌早期筛查的主要血清肿瘤标志物，CA125被普遍应用于卵巢癌的诊断、治疗效果的评估及复发的预测，并被视为卵巢癌临床诊断的“金标准”。但是血清CA125敏感性较低，在盆腔炎、腹膜炎、子宫内膜异位症以及其他肿瘤中也有一定的表达，容易造成假阳性。因此，血清CA125在卵巢癌临床诊断中的应用具有一定的局限性。

人附睾蛋白4(HE4)是1991年由Kirchhoff等学者发现的一种富含半胱氨酸的小分子分泌性糖蛋白，在卵巢正常组织中未见其表达，而在卵巢肿瘤组织中高度表达(Steffensen K D,Oncology letters)。目前认为HE4是一种针对早期卵巢癌检测的新型血清标记物，同时HE4也是继CA125之后第一个获得美国食品药品管理局批准的可用于监测卵巢癌复发患者的肿瘤标志物。研究表明，HE4诊断的特异性显著高于血清CA125，其水平变化与卵巢癌发展阶段具有一定的相关性，一方面可以作为疾病诊断的参考，另一方面可以作为治疗效果监测指标，在监测预后效果上，也具有重要意义。但是HE4临床诊断卵巢癌的灵敏度比血清CA125低。血清CA125和HE4检测都是检测卵巢癌的重要肿瘤标志物，单独检测一个指标时，却各有不足。因此，二者联合检测在卵巢癌临床诊断中的应用逐渐广泛，CA125联合HE4的敏感性和特异性均优于二者的单独使用，在提高检出率的同时显著降低漏诊率和误诊率，可用于卵巢癌的早期诊断、鉴别、治疗监测及预后评估(Ghasemi N，MedicalOncology)。

目前国内外在卵巢癌肿瘤标志物早期检测方面大多是通过酶联免疫法和化学发光免疫分析法来实现，利用双抗体夹心的原理联合几种标志物进行定量检测方法可以对卵巢癌肿瘤标志物定量检测，但是需要借助仪器，操作复杂，检测时间较长。市场上尚无针对卵巢癌肿瘤标志物联合检测的侧向层析试剂盒。

本发明的目的是提供一种特异性好、灵敏度高、准确性强、操作简便、成本较低并适用于早期卵巢癌的床旁快速筛查诊断和家庭自检的HE4联合CA125双抗体夹心法纳米硒免疫层析试剂盒。本试剂盒制备基于抗原抗体免疫反应原理，利用双抗体夹心法。适合标记免疫球蛋白的纳米硒具有可以标记其他抗原或抗体的特点。

现有用于检测血液样本的家庭用侧向层析试剂盒存在以下缺陷：