[发明专利]一种体外评价CAR-T杀伤活性的方法

权利要求书

1.构建一种能够在体外评价CAR-T杀伤功能的细胞株，并提供一种运用RTCA检测CAR-T的体外杀伤活性的方法，具体步骤为：

(1)制备并培养表达靶标抗原的贴壁细胞，所述靶标抗原为待检测CAR-T特异性识别的靶标抗原；

(2)向含有贴壁细胞的培养体系中加入待检测的CAR-T细胞；

(3)采用RTCA检测CAR-T细胞对贴壁细胞的杀伤作用。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备并培养稳定表达靶标抗原的贴壁细胞，具体包括：贴壁细胞的复苏，载体的构建，细胞的转染；优选的，还包括转染结束后的细胞筛选。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，细胞的转染为病毒转染、脂质体转染、电转或基因枪法转染。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，贴壁细胞为肿瘤细胞，优选的，肿瘤细胞选自下列肿瘤中的一种或几种：肺癌、鼻咽癌、食管癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌、淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、黑色素瘤、垂体瘤、膀胱癌、骨髓瘤、神经细胞瘤、胶质瘤、皮肤癌、颅内动脉瘤、前列腺癌细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，贴壁细胞选自下列细胞中的一种或几种：J82、JEG-3、KMST-6、KB、LAN-5、MKN45、MeWo、MDA-MB-468、ME-180、MES-SA、MG-63、MRC-5、MT-2、Hep3b、HEP2、HeLa、HCT116、HepG2、H1299、HITB5、G401、GOTO、NCI-H441、H4、NCI-H187、HBL-100、HASMCs、HaCaT、HCA-7、hAECs、RKO、RH-18、SK-BR-3、Saos-2、SiHa、SHEP、SK-LMS-1、SK-N-SH、SK-N-AS、SK-N-MC、SKOV3、SK-N-BE(2)、SMMC-7721、SK-UT-1、NB324K、NCI-H23、NCI-H460、NCI-H295、NCI-H358、NHDF、NHBE、NT2、NHFF、NT2-D1、OVCAR-3、PANC1、HMEC-1、HT-29、Hs68、HS-578T、HMVEC-L、HuH-7、HT1080、HUVEC,HUAEC、HuTu-80、IMR-32、IMR-90、CaSki、Colo205、SNB19、SW620、SW480、T47D、T98G、TSA201、SK-N-BE(2)-C、BEAS-2B、A549、A204、A875、A498、A-431、ARPE-19、ACHN、CWR22RVL、DU145、Daoy、LNCaP、MDA-MB-453、MAGI-CCR5、MDA-MB-231、MCF-10、MCF-7、UOK257、U373MG、U87,U87MG、U251、U-2OS、BOSC23、C3A、C33、BT549、CIR,HMy2.CIR、Calu-3、Caco-2、Calu-6、Capan-2、C4-2、CCD-1064SK、OV2008、293EBNA、A2780、9HTE、5637、EBC-1、ES-2、SRA01/04、FLP-IN-293、FLP-IN T-REX293。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，靶标抗原为血液肿瘤细胞表面表达的抗原。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，表达靶标抗原的贴壁细胞和待检测CAR-T细胞的比例为：1:5-5:1；优选的，表达靶标抗原的贴壁细胞和待检测CAR-T细胞的比例为：1:5、1:1、5:1。