[发明专利]一种用于卵巢癌临床诊断的lncRNA基因标志物和试剂盒

说明书

本发明公开了一种长链非编码RNA基因标志物LincROR在用于卵巢癌早期诊断、预后及化疗敏感性判断中的应用。本发明提供的血浆、血清LincROR用于诊断卵巢癌和非卵巢癌(包括卵巢良性囊肿和健康对照)的诊断性能优异，联合已有的肿瘤标志物CA125应用显著提高卵巢癌临床诊断和化疗敏感性中判断的准确度、灵敏度和特异性，可以用于开发成早期诊断卵巢癌的诊断试剂盒。

技术领域

本发明属于基因诊断领域，具体涉及用于早期诊断卵巢癌的lncRNA基因标志物。

背景技术

卵巢癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，死亡率位于妇科肿瘤的首位。因早期无特异性的症状及体征，80％左右卵巢癌患者在确诊时已为晚期，5年总体生存率仅35％～57％。若能早期诊断、及时治疗，5年生存率可达90％。CAl25被认为是目前卵巢癌早期诊断的唯一最佳标志物，但单独用CAl25进行筛查有一定局限性，有20％的卵巢癌患者CA125呈阴性或低浓度水平，且在某些妇科良性疾病如子宫内膜异位症、消化系统良恶性肿瘤及经期、妊娠等生理状态下CA125也会升高。

长链非编码RNA(Lnc RNA)是一类长度大于200碱基的RNA分子，由于缺少有效的开放式阅读框不编码蛋白，但具备复杂的生物学功能并在各种生物过程中发挥重要的作用，如染色质修饰、X染色体的失活、参与基因转录、翻译以及到蛋白活动调控等，其变异和调节能够导致包括肿瘤在内的多种疾病。LincROR(Large intergenic noncoding RNA ROR，LincROR)是LncRNA亚类中的一员，最先在诱导多能干细中产生过程中被鉴定出来，可受Oct4、Sox2和Nanog等关键的转录因子控制，有效调节细胞存活和重编程过程。目前很多研究显示异常表达的LincROR通过多种途径参与了肿瘤细胞的凋亡、增殖、侵袭与转移等调控，与多种恶性肿瘤的发生与发展有着密切的关系。如在乳腺癌中，高表达的LincROR可通过抑制miR-145表达，使ARF6表达增加，从而促进三阴性乳腺癌的发生发展；在肝细胞癌中，LincROR通过海绵吸附作用调控miR-145抑制ZEB2的表达，诱导上皮间质转化促进肝细胞癌的侵袭和转移；在结直肠癌中，LincROR通过对p53/miR-145信号通路的负调节，降低了结直肠癌细胞对放疗的敏感性；在卵巢癌中，LincROR可能通过wnt/β-cantenin信号通路诱导上皮间质转化，参与卵巢癌的发生发展。已有研究将组织或血液中的Lnc RNA作为疾病诊断的标志物，如前列腺癌基因3(PCA3)是第一个被公认的LincRNA类肿瘤标志物。

发明内容

鉴于目前卵巢癌临床诊断缺乏较为准确的分子标志物，本发明的目的在于克服现有技术对卵巢癌早期诊断的不足，提供用于早期诊断卵巢癌的lncRNA基因标志物，以用于制备卵巢癌的临床诊断试剂盒。

本发明的第一个方面，lncRNA基因标志物在制备早期诊断卵巢癌的试剂盒中的应用，所述lncRNA基因标志物为人Long intergenic non-protein coding RNA，regulatorof reprogramming(LincROR，Gene ID：100885779)。其特征在于可以通过检测患者血清或血浆中LincROR的表达水平进行卵巢癌临床诊断。

本发明的第二个方面，用于测定血浆、血清基因标志物LincROR表达水平的一种引物组合物，LincROR引物序列：引物1(PCR产物95bp)，上游引物GAATCAGAGTGCTGGGCAGT和下游引物TCAGCAGCTCATGCCCTAAC；引物2(PCR产物99bp)，上游引物AACAGTAGAGTGGGGCCTGA和下游引物GTGGCACACTGCTCAAAACC。其特征在于可以通过同一基因的俩对不同引物组合进行Q-PCR扩增，对试验操作误差进行内部纠正、设置质控标准(当试验结果超过±10％时不可信，需要重复)。通过该引物组合进一步提高患者血清或血浆中LincROR表达检测的精确度和准确性，为卵巢癌临床诊断提供方法学保障。