[发明专利]核酸适配体递送载体，其制备方法及其应用

说明书

本发明揭示了一种核酸适配体递送载体、包含载体的药物组合物、其制备方法和应用，其中核酸适配体递送载体包括以红细胞膜为骨架的纳米囊泡，所述纳米囊泡上负载有胆固醇修饰的核酸适配体。所获载药靶向性纳米囊泡具有对肿瘤细胞的特异性，并能够沉默耐药肿瘤细胞P‑糖蛋白的表达，逆转其耐药性，同时实现在较低阿霉素浓度下对耐药性肿瘤细胞的有效杀伤。

技术领域

本发明涉及一种核酸适配体，具体涉及一种核酸适配体递送载体，其制备方法及其应用，属于分子生物学领域。

背景技术

核酸适配体，也被称为核酸适体、适配子等，是从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高亲合性和高特异性地与各种靶标结合的单链寡核苷酸。最早是由Szostak和Gold两个小组几乎同时提出。1990年，Ellington和Szostak报道了能结合小分子有机染料的RNA片段，并将其命名为Aptamer。适配体(aptamer)是指利用指数富集的配基系统进化(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)技术，从人工合成的寡核苷酸文库中筛选得到的具有亲和性高、特异性强的能够与靶分子特异性结合的短的单链DNA和RNA分子。

小核酸作为基因调控的功能分子在多种疾病的治疗领域中有着广泛的应用，尤其在肿瘤治疗方面，通过小核酸调控肿瘤相关基因的表达从而达到抑制肿瘤的生长、侵袭、诱导肿瘤凋亡等目的，已成为一种有潜力的治疗方法。然而，如何精准、高效的将小核酸递送至肿瘤等疾病组织，一直是该领域亟待解决的关键问题。

传统的小核酸递送方式如阳离子脂质体、树枝状分子、阳离子聚合物、无机纳米颗粒等方式虽然能够将小核酸成功的递送至细胞，然而这些载体材料却很难满足对生物相容性的要求。近年来，细胞外囊泡尤其是外泌体被认为是有望替代合成纳米材料的下一代药物递送载体。外泌体等胞外囊泡来源于天然细胞，因此具有较低的细胞毒性和良好的生物相容性。此外，由于外泌体在生物系统中发挥着细胞间通讯的功能，因此具有特定细胞的靶向性和极佳的递送能力。然而天然外泌体的产量很低，且分离方式复杂，大规模获得外泌体需要的成本很高。本发明因此而来。

发明内容

本发明提供一种核酸适配体递送载体，包括以红细胞膜为骨架的纳米囊泡，所述纳米囊泡上负载有胆固醇修饰的核酸适配体，用于解决现有技术中存在的技术问题。

优选的技术方案中，所述核酸适配体具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；优选的，所述纳米囊泡的粒径在50～200nm范围内；优选的，所述纳米囊泡膜表面保留红细胞膜功能分子。

优选的技术方案中，所述核酸适配体递送载体通过如下步骤制备：

(1)获取红细胞膜；

(2)将红细胞膜制备成未负载的纳米囊泡；

(3)将胆固醇修饰的适配体通过孵育的方式负载至未负载的纳米囊泡的膜上。

本发明的另一目的在于提供一种核酸适配体递送载体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)获取红细胞膜；

(2)将红细胞膜制备成未负载的纳米囊泡；

(3)将胆固醇修饰的核酸适配体通过孵育的方式负载至未负载的纳米囊泡的膜上。

本发明的另一目的在于提供一种基于核酸适配体靶向的药物组合物，其特征在于，所述组合物包括：

1)药学上有效量的活性药物；

2)所述的核酸适配体递送载体；

其中活性药物负载在所述核酸适配体递送载体上。