[发明专利]一种从金钗石斛中制备生物碱的富集方法

权利要求书

1.一种从金钗石斛中制备生物碱的富集方法，其特征在于，包括以下步骤：

a) 金钗石斛浸膏的制备：取金钗石斛药材粉末，加入10~30倍量且浓度为5%~100%的乙醇水溶液，采用超声回流法或加热回流法提取1~50次，每次提取时间为5~1000分钟，合并提取液，抽滤，减压浓缩，得金钗石斛浸膏；

b) 金钗石斛粗碱的制备：取所述金钗石斛浸膏溶解于浓度为10%~100%乙醇水溶液中，调节浓度至1 mg/mL~1000 mg/mL，经滤膜去除固体物，采用弱阴离子交换的琼脂糖凝胶填料柱对其进行脱色除杂、富集，减压浓缩至有机溶液完全除去，即得金钗石斛粗碱；

c) 金钗石斛生物碱的制备：取所述金钗石斛粗碱溶解于浓度为10%~100%乙醇水溶液中，调节浓度至1 mg/mL~1000 mg/mL，采用强阳离子交换的琼脂糖凝胶填料柱对其进行洗脱、分离、富集，减压浓缩至有机溶剂完全除去，得金钗石斛生物碱。

2.根据权利要求1所述的一种从金钗石斛中制备生物碱的富集方法，其特征在于，所述步骤b)中采用弱阴离子交换的琼脂糖凝胶填料柱对其进行脱色除杂、富集，包括：上样量为弱阴离子交换柱填料质量的1%~100%，采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式，经过一次淋洗，淋洗液为1~10倍柱体积浓度为10%~100%乙醇水溶液。

3.根据权利要求1或2所述的一种从金钗石斛中制备生物碱的富集方法，其特征在于，所述弱阴离子交换的琼脂糖凝胶填料柱的填料为氨基修饰的琼脂糖填料，所述弱阴离子交换的琼脂糖凝胶填料柱的参数为：每毫升填料载样量为200mg~1g，填料粒径为10 μm~200 μm。

4.根据权利要求1所述的一种从金钗石斛中制备生物碱的富集方法，其特征在于，所述步骤c)中采用强阳离子交换的琼脂糖凝胶填料柱对其进行洗脱、分离、富集，包括：上样量为强阳离子交换柱填料质量的5%~50%，采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式，经过四次淋洗。

5.根据权利要求4所述的一种从金钗石斛中制备生物碱的富集方法，其特征在于，所述四次淋洗包括：淋洗一，淋洗液为1 mL~500mL且浓度为10%~100%乙醇水溶液，流速为1 mL/min~50 mL/min；淋洗二，淋洗液为1mL~500mL且浓度为10%~100%的乙醇/氨水溶液，其中氨水溶液体积浓度为1%~50%，流速为1 mL/min~50 mL/min；淋洗三，淋洗液为1 mL~500 mL且浓度为10%~100%的乙醇水溶液，流速为1 mL/min~50 mL/min；淋洗四，淋洗液为1mL~100mL且浓度为10%～100%的乙醇/盐酸水溶液，其中盐酸水溶液体积浓度为0.5%~10%，流速为1mL/min~100 mL/min。

6.根据权利要求1或4所述的一种从金钗石斛中制备生物碱的富集方法，其特征在于，所述强阳离子交换的琼脂糖凝胶填料柱的填料为磺酸基修饰的琼脂糖填料，所述强阳离子交换的琼脂糖凝胶填料柱的参数为：5mL~10mL预装柱，粒径为5 μm ~500 μm。