[发明专利]一种MTB新靶标mts90的高灵敏、快速检测方法的建立与应用

说明书

本发明建立了一种MTB新靶标mts90的高灵敏、快速检测方法。所述检测方法以RPA技术为基础对mts90进行扩增检测，包括采用不同的方法筛选RPA扩增mts90靶标的最优引物，设计特异性探针对mts90进行实时检测。以mts90重组质粒标准品、相关分枝杆菌和常见病原体的基因组DNA为模板，分析该方法的灵敏度和特异性。并通过检测疑似结核临床样本，建立受试者工作特征曲线并评价该方法的准确性，同时与qPCR的检测结果进行对比分析，评价上述方法的临床应用性能。本发明的检测方法不依赖昂贵仪器设备，操作简单，成本低，能快速、灵敏、特异地检测mts90，在检测疑似结核样本中，与临床检测结果符合率高，能准确、快速检测MTB，具有潜在的临床实用性，有望成为筛查早期TB的工具。

技术领域

本发明涉及核酸检测生物分析技术领域，特别是涉及一种检测结核分枝杆菌(MTB)分子靶标(mts90)的高灵敏、快速检测方法的建立与应用。

背景技术

结核病(Tuberculosis,TB)的流行性传播严重危害了公共的卫生安全，特 别是在TB高发和卫生资源贫乏的国家和地区。由于缺乏快速、准确的TB检测方 法，不能及时对早期TB进行诊断治疗，这加剧了疫情的传播，并可能引发多药 耐药菌株，从而延缓了控制TB流行的步伐。因此，迫切需要研发高灵敏、快速 的TB诊断方法。

在我们的前期研究中，发现了一个新的人型结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)分子靶标——mts90，而目前关于mts90的检测方法存在灵 敏度不够高，检测时间长和依赖昂贵的专门设备等问题。因此，有必要建立一种 易于操作和不依赖昂贵仪器设备的能高灵敏、快速检测mts90的方法。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种MTB新靶标 mts90的高灵敏、快速检测方法的建立与应用，用于解决现有技术中缺乏快速准 确的TB检测方法、MTB分子靶标的检测方法灵敏度不高、耗时长、设备昂贵等 问题。

为实现上述目的及其它相关目的，本发明提供一种以RPA技术为基础对 mts90进行扩增检测的方法，包括：筛选最优引物、分析方法的灵敏度和特异性、 准确性，同时评价该方法的临床应用性能。

可选地，所述筛选最优引物根据英国TwistDx公司的RPA设计方案(see Appendixat https://www.twistdx.co.uk/en/support/rpa-assay-design-2)， 设计RPA引物和探针。

可选地，所述分析方法以mts90重组质粒标准品、相关分枝杆菌和常见病原 体的基因组DNA为模板，分析该方法的灵敏度和特异性。

可选地，所述评价该方法的准确性包括通过检测疑似结核临床样本，建立受 试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic，ROC)并评价该方法 的准确性。

可选地，所述评价该方法的临床应用性能包括，同时与qPCR的检测结果进 行对比分析，评价该方法的临床应用性能。

本发明所提供的一种MTB新靶标mts90的高灵敏、快速检测方法的建立与应用， 包括如下步骤：

(a)引物和检测探针的筛选

可选地，根据英国TwistDx公司的RPA设计方案，设计RPA引物和探针。 其中，引物的扩增子均包含了MTB新分子靶标mts90的全部序列。

可选地，以检测mts90序列为目的，设计探针。