[发明专利]一种酸耐受性提高的重组菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种酸耐受性提高的重组菌，其特征在于，该重组菌过表达羟脂酰-ACP脱水异构酶基因fabA，宿主菌为大肠杆菌。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述羟脂酰-ACP脱水异构酶基因fabA，Genbank登录号为945568。

3.权利要求1或2所述的重组菌的制备方法，其特征在于，将羟脂酰-ACP脱水异构酶基因fabA，连入表达载体，构建重组质粒，将构建好的重组质粒转化至宿主细胞，获得重组菌。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤如下：

1)以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)的基因组为模板，通过PCR扩增获得羟脂酰-ACP脱水异构酶基因fabA的目标片段，并回收目标片段；

2)将步骤1)所得的fabA目标片段，通过SalI和NotI酶切后连接至经同样酶切后的表达载体pACYCDuet1，获得重组质粒pACYCDuet1-fabA；

3)将步骤2)所得的重组质粒转化至宿主细胞，获得重组菌。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的PCR扩增用的引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示。

6.权利要求1或2所述的重组菌在生产3-羟基丙酸及其衍生物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，是指在重组菌中过表达3-羟基丙酸的合成基因乙酰辅酶A羧化酶基因acc和丙二酸单酰辅酶A还原酶基因mcr，获得酸耐受性提高的3-羟基丙酸基因工程菌株，将该工程菌株接种到发酵培养基中经发酵培养制备获得3-羟基丙酸及其衍生物。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述3-羟基丙酸的合成基因乙酰辅酶A羧化酶基因acc，来自于大肠杆菌(Escherichia coli)，其中，亚基accA的GeneBank ID为6062185，亚基accB的GeneBank ID为6058890，亚基accC的GeneBank ID为6058863，亚基accD的GeneBank ID为6059083；所述丙二酸单酰辅酶A还原酶基因mcr，来自于橙色绿曲挠菌(Chloroflexus aurantiacus)，所述丙二酸单酰辅酶A还原酶基因mcr由经N端改造的片段mcrN和经C端改造的片段mcrC组成，所述经N端改造的片段mcrN，其核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示，所述经C端改造的片段mcrC，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述发酵培养，是指在37℃，180rpm的条件下培养至OD₆₀₀达到0.6时，加入终浓度为100μM异丙基硫代半乳糖苷IPTG诱导，诱导后置于30℃，180rpm的条件下继续培养48h后终止发酵，发酵过程中不添加任何碱调节pH。

10.权利要求1或2所述重组菌在制备具有酸耐受性基因工程菌中的应用。