[发明专利]一种酸枣仁中黄曲霉毒素的提取检测方法

说明书

本发明公开了一种酸枣仁中黄曲霉毒素的提取检测方法，包括将酸枣仁粉碎，过二号筛，得酸枣仁粉末并置于具塞离心管中，加入甲醇或乙腈，涡旋振荡后，以100W~500W的超声功率超声5min~30min；加入无水硫酸钠或无水硫酸镁或氯化钠，涡旋混合后，转速离心，得上清液；取上清液至离心管中，加入十八烷基硅烷键合硅胶或N‑丙基乙二胺净化，涡旋混合后，转速离心，经有机相滤膜过滤，得待测液；取黄曲霉毒素标准使用液经有机相滤膜过滤后，采用液相色谱‑串联质谱仪检测所述待测液。本发明方法操作简单、快速，降低了样品基质对目标物的干扰，减少了基质效应，灵敏度高，污染少，检测成本较低，易于推广。

技术领域

本发明涉及中药提取检测技术领域，具体涉及一种酸枣仁中黄曲霉毒素的提取检测方法。

背景技术

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉产毒菌株的次级代谢产物，结构上是一类二氢呋喃香豆素的衍生物，毒性远高于氰化物、碘化物和有机农药，是迄今为止发现毒性最强的一类真菌毒素，黄曲霉毒素常见于花生、谷物和中药材等植物源性农副产品中，其危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。

酸枣仁具有补肝、宁心、敛汗、生津的作用，用于虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴等，《本草纲目》将其列为上品，但酸枣仁易发生霉变，从而产生多种对人体有害的霉菌毒素，其中以黄曲霉毒素危害最大，当前，我国关于黄曲霉毒素的测定主要集中在对粮食、花生及其制品、奶类及其制品等，对于中药材中黄曲霉毒素的检测方法相对比较落后。

黄曲霉毒素常见的检测方法有薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。薄层层析法是黄曲霉毒素最早、应用最广的分离分析技术，但样品前期处理繁琐、提取液杂质较多，不能满足于现代分析的需求；高效液相色谱法需要对样品进行衍生，操作复杂且分析时间较长；酶联免疫吸附法的复杂基质易造成干扰，出现假阳性；目前《中国药典》2015版针对黄曲霉毒素的检测方法均采用免疫亲和柱来净化样品，但该方法操作复杂且成本较高。

发明内容

有鉴于此，本发明期望提供一种酸枣仁中黄曲霉毒素的提取检测方法，操作简单、快速，降低了样品基质对目标物的干扰，减少了基质效应，灵敏度高，污染少，检测成本较低，易于推广。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供了一种酸枣仁中黄曲霉毒素提取检测方法，包括以下步骤：

a)将酸枣仁粉碎，过二号筛，得酸枣仁粉末并置于具塞离心管中，加入甲醇或乙腈，料液比为1:1～1:100；以1000r/min～3000r/min的转速涡旋振荡1min～10min后，以100W～500W的超声功率超声5min～30min；加入0.1g～20g无水硫酸钠或无水硫酸镁或氯化钠，以1000r/min～3000r/min的转速涡旋混合1min～10min后，以1500r/min～4500r/min的转速离心8min～16min，取上清液；

b)取上清液至离心管中，加入十八烷基硅烷键合硅胶或N-丙基乙二胺净化，以1000r/min～3000r/min的转速涡旋混合1min～10min后，以1500r/min～4500r/min的转速离心3min～10min，经0.1μm～0.6μm孔径的有机相滤膜过滤，得待测液；

c)取黄曲霉毒素标准使用液经0.1μm～0.6μm孔径的有机相滤膜过滤后，采用液相色谱-串联质谱仪检测所述待测液，色谱柱为Unitary C18，流动相A为甲酸铵或醋酸铵或甲酸，流动相B为甲醇，流速为0.2mL/min～0.5mL/min，柱温为25℃～40℃，进样体积为1μL-10μL，电离方式为电喷雾正离子电离，检测方式为多离子反应监测。

进一步地，所述有机相滤膜孔径为0.2μm～0.5μm。

进一步地，所述色谱柱填料为烷基硅烷键合硅胶，所述色谱柱长度为100mm～250mm，内径为2.1μm～4.6μm，粒径为1.7μm～5μm。