[发明专利]微量元素添加剂的质量控制方法

说明书

本发明涉及一种微量元素添加剂的质量控制方法，包括以下步骤：S1、将小肠上皮细胞接种至细胞培养小室的上室，将DMEM完全培养液加入至下室，然后培养至小肠上皮细胞的跨膜电阻值为300Ω·cm²～600Ω·cm²时，将DMEM完全培养液更换成HBSS缓冲液，继续培养12～24小时，得到小肠单层上皮细胞模型；S2、移除细胞模型中的HBSS缓冲液，在上室加入供试溶液，在下室加入HBSS缓冲液，培养20～26小时；其中，所述供试溶液主要由HBSS缓冲液和微量元素添加剂配制而成；S3、分别收取上室和下室中的溶液并进行消解，得到上室消解液和下室消解液；采用ICP技术对上室消解液和下室消解液进行测定，得到上室消解液和下室消解液中微量元素的浓度；根据微量元素的浓度得到微量元素添加剂的转运率。

技术领域

本发明涉及动物营养学技术领域，特别是涉及一种微量元素添加剂的质量控制方法。

背景技术

微量元素是指在动物体内含量低于0.01％的元素，是动物体内必需的营养素。目前在饲料中常用的微量元素添加剂包括Fe、Zn、Cu、Mn、Se、I、Co和Cr等，微量元素添加剂产品更是多达40余种。但是，由于当前的检测方法只能检测产品某微量元素的总量，无法准确测定不同形态结构微量元素的含量，一定程度上阻碍了产品的研发和推广。一些有机微量元素添加剂的产品实际上是混合物，生物学效率不高。为了推动微量元素添加剂的开发和推广，对微量元素添加剂的转运效率进行测定，建立微量元素添加剂转运效率的相关标准，用以规范微量元素添加剂的生产和应用是非常必要的。

不同形态微量元素的生物学效价及产品纯度是当前微量元素添加剂质量控制的关键指标。转运效率是影响微量元素产品生物学效价的关键因素。目前评估微量元素的转运效率的方法主要是动物试验和Ussing chamber(尤斯灌流室)技术。其中，动物(猪、家禽等)试验，通过在日粮中添加微量元素添加剂，评估其生产性能、血液和脏器中微量元素的浓度。该方法存在测定周期长、动物个体差异大，而且动物初期的元素储备量直接影响试验结果等缺点。Ussingchamber技术是通过离体肠上皮组织模型，在缓冲液中添加微量元素添加剂，通过测定离体肠上皮组织的电压、电流变化和另一侧微量元素的浓度来反应产品的生物学效率。该方法需要较多的试验动物，成本高，且离体组织活性较低，在有限的时间内转运的微量元素有限，要求微量元素的测定方法具有更低的检测限值，导致成本再次增加。

因此，有必要开发更为方便、快捷的转运效率测定方法并对产品纯度进行质量控制，以指导微量元素添加剂的开发和应用实践。

发明内容

基于此，有必要提供一种微量元素添加剂的质量控制方法，具有方便快捷、检测结果准确、节约动物的优点。

一种微量元素添加剂的质量控制方法，包括以下步骤：

S1、将小肠上皮细胞接种至细胞培养小室的上室，将DMEM完全培养液加入至所述细胞培养小室的下室，然后培养至所述小肠上皮细胞的跨膜电阻值为300Ω·cm²～600Ω·cm²时，将所述DMEM完全培养液更换成HBSS缓冲液，继续培养12～24小时，得到小肠上皮细胞单层上皮细胞模型；

S2、移除所述小肠上皮细胞单层上皮细胞模型中的HBSS缓冲液，在所述上室加入供试溶液，在所述下室加入HBSS缓冲液，于37℃±0.2℃、CO₂的体积浓度为5％±0.1％的条件下培养20～26小时；其中，所述供试溶液主要由HBSS缓冲液和微量元素添加剂配制而成；

S3、分别收取所述上室和所述下室的溶液，并进行消解，得到上室消解液和下室消解液；采用ICP(电感耦合等离子体)分析技术分别对所述上室消解液和所述下室消解液进行测定，得到所述上室消解液和所述下室消解液中微量元素的浓度，根据所述上室消解液和所述下室消解液中微量元素的浓度，得到所述微量元素添加剂的微量元素转运效率。